植物的组织培养-菊花

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1、专题3植物的组织培养课题1菊花的组织培养一、课时重难点【重点】1•植物组织培养的相关概念和过程2.影响植物组织培养的因素3.植物组织培养过程中使用的无菌技术。【难点】1・影响植物组织培养的因素。2.植物组织培养过程中使用的无菌技术。三、授课过程：(-)植物组织培养的相关概念和基本过程1•植物组织培养的相关概念(1)细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在、和上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是棊因的结果。(2)细胞的全能性：的植物细胞仍然貝•有发育成为的潜能。细胞全能性是组织培养的基本原理。(3)愈伤组织：山离

2、体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过过程形成的组织，就叫愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种的呈无定形状态的(4)脱分化：由的植物组织或细胞产生的过程，称为脱分化，又叫去分化。(5)再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成,这个过程叫做再分化°(6)外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。2.植物组织培养的慕本过程人为使用植物激索控制移植完整的植物体试管苗（二）影响植物组织培养的因素1.内部因素：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。同种植物材料，,等也会影响实验结果。菊花的组织培养，一般选择的茎

3、上部新萌牛:的侧枝。2.外部因素：（1）营养条件：常用的是培养基，其主要成分包括：,如；,如;等。（2）植物激素：植物激素中和是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。、以及等，都会影响实验结果。（3）环境因素：、、等条件也能影响梢•物组织培养。菊花组织培养，一般PH控制在；温度控制在;每天用tl光灯照射小时。【思考】1.MS培养基中，各种营养成分各有什么作用？与微生物培养基的配方相比，有什么不同？微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；LI•氨酸、维生素等物质主耍是为了满足离体植物细胞在

4、止常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养革以冇机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大虽无机营养，无机盐混合物包括植物牛长必须的人量元索和微量元素两人类。2.生长素使用的先后顺序、用量比例不同分别会造成哪些影响？（三）实验操作过程1.制备MS固体培养基实验室一般使川4°C保存的配制好的培养基母液來制备（1）配制各种母液。配制母液时，大量元索浓缩,微量元素浓缩o常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质录浓度单独配制母液。用母液配制培养基时,蛊耍根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。（2

5、）配制培养棊。配制1LMS培养基时，将称量好的琼脂加入800mL蒸憎水，加热熔化，然后加入蔗糊30g,依次加入母液,定容至lOOOmLo,然后分装到锥形瓶中，每瓶分装o（3）灭菌。高压蒸汽灭菌1.夕卜植体消毒选取菊花茎段时，要取。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表血火菌时，一方面要考虑;另一方面还要考虑植物材料的。不同药剂、不同植物材料，其至不同器官要区别对待。一-般情况下，细菌污染可能是由接种人员造成的，真菌污染可能是灭菌不当。过程:流水冲洗一软刷刷洗一流水冲洗一无菌吸水纸吸干外植体表面一体积分数为

6、的酒精屮摇动2〜3次,持续-无菌水清洗一无菌吸水纸吸干外植体表面一质最分数为0.1%的溶液小1〜2min-＞无菌水屮至少清洗3次2.接种接种前，用体积分数70%的酒精将工作台擦拭，然后点燃酒精灯。所有的接种操作必须在酒精灯旁进行，并月.每次使用器械后，都要用火焰灼烧灭菌3.培养接种后的锥形瓶最好放在屮培养。培养期间定期消毒，温度控制在18-22°C,并且每天用H光灯光照12h4.移栽5.栽培附：一•般來说，容易进行的植物，也容易进行组织培养。【思考】：（1）实验操作过程小为什么要进行一系列的消毒、灭菌，实验中是如何做到无菌操作的？（2）你打

7、算做儿组重复？你打算设置对照实验吗？【知识补充】无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键植物组织培养不同于打•插、分根、叶插等常规无性繁殖。由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，所以对培养条件的要求较高，对无菌操作的要求非常严格。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料（外植体）的消毒灭菌。对培养材料进行表而灭菌吋，一方而要考虑药剂的消毒效果；另一方而还要考虑植物材料的耐受能力。不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。