hsp65-、rpoB-PCR-RFLP用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的研究.pdf

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1、黄根成：hsp65=、rpoB-PCR．RFLP用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的研究hap65-、rpoB-PCR．RFLP用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的研究研究生：黄根成导师：焦新安教授万康林研究员中文摘要非结核分枝杆菌(NTM)是除结核分枝杆菌复合群(MTBC)、麻风分枝杆菌(肱leprae)外的一类分枝杆菌。NTM与MTBC均可引起肺部以及其它部位病变，而且临床症状相似，鉴别诊断困难，所以分枝杆菌菌种鉴定对于疾病的诊断、治疗及预后意义重大。以细菌培养为基础的传统生化鉴定方法，费力耗时，结果提供不及时，有时结果不准确。随着分子生物学的发展，出现了众多以分子生物学技术为基础的鉴定方法，如PCR．S

2、SCP、PCR．RFLP、DNA探针、DNA芯片、DNA直接测序等，以其快速、高效、特异等优点而受到青睐。本研究采用从国内收集的NTM分离株，探讨基于hsp6：和rpoB的PCR—RFLP对NTM分离株菌种鉴定的应用价值。1hsp65-和rpoB-PCR-RFLP在非结核分枝杆菌临床分离株鉴定应用中的效果评价用PNB／TCH试验和多位点PCR从临床分离株鉴定出NTM后，以螂测序作为金标准，用hsp65-和rpoB-PCR．RFLP将NTM鉴定至种。结果，收集的130株省级结核病院鉴定为NTM的临床分离株中，经我们进一步用PNB／TCH试验和多位点PCR鉴定，22株为MTB，108株为NTM。P

3、NB／TCH试验与多位点PCR结果无统计学差异(P>0．05)。多位点PCR所需时间较短。108株NTM中，经hsp65-和rpoB-PCR-RFLP鉴定为胞内分枝杆菌53株(49．07％)、脓肿分枝杆菌23株(21．30％)、鸟分枝杆菌19株(17．59％)、马赛分枝杆菌和戈登分枝杆菌各4株(3．70％)、首尔分枝杆菌、熊本分枝杆菌、偶发分枝杆菌、乳牛分枝杆菌和莫娜分枝杆菌各l株(0．93％)。福建NTM肺病病原种类繁多，以胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌为主。以hsp63基因测序结果为标准，hsp65PCR．RFLP的敏感性为99．07％，特异性为100％，rpoBPCR．RFLP的

4、敏感性为98．15％，特异性为100％。hsp65PCR．RFLP与rpoBPCR．RFLP结果差异无统计学意义(P>O．05)。2扬州大学硕士学位论文2动物标本分枝杆菌的分离与鉴定用中和离心法消化动物标本，分别接种L-J培养基和MGIT960培养基进行分枝杆菌分离培养。用PNB／TCH试验、hsp65DNA直接测序、hsp65-和rpoB-PCR．RFLP、多位点PCR和Spoligotyping进行分离株菌种鉴定。从110份动物标本中共分离到29株抗酸杆菌，经鉴定，19株为NTM，包括偶发分枝杆菌11株(57．89％)、脓毒分枝杆菌5株(26．32％)、胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和莫娜分枝

5、杆菌各l株(5．26％)，3株为MTB，7株为鼻疽诺卡菌。关键词：非结核分枝杆菌；菌种鉴定；PCR．RFLP；hsp65．基N；删基因黄根成：hsp6孓、rpoB-PCR—RFLP用于非结核分枝杆菌菌种鉴定的研究3PCR-RFLPbasedonhsp65andrpoBforspeciesidentificationofnontuberculousmycob犹terial

6、IIIIIIIIIIII1111lY2257795M．S．candidate：GenchengHuang。Advisors；Prof．XinanJiaoProf．KanglinWanAbstractMycobacteriumc

7、omprisesMycobacteriumtuberculosiscomplex(MTBC)．膨lepraeandnontubcrculousmycobacteria(NTM)．BecausebothNTMandMTBCcancausepulmonarydiseasesanddamagesofotherpartsofthebody,ofwhichthesymptomsareoftensimilar,differentialdiagnosisinclinicalpracticeisdifficult．SoitisimportanttOidentifyspeciesofMycobacteriumf

8、orthediagnosisandtreatment．Thebiochemicalmethodsbasedoncultureforthespeciesidentificationarelaboriousandtime-consuming，sometimesevenprovidingwrongresults．Withthedevelopmentofmolecularbiology，lotsofrap