实验一、 海洋微藻的培养、观察与计数.doc

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1、第一部分环境生物学实验实验一、海洋微藻的培养、观察与计数一、实验目的：1、通过实验了解藻类生长的基本条件和方法，掌握海洋微藻的基本培养方法；2、显微镜下观察并识别儿种常见海洋微藻；3、了解血球计数板的计数原理，掌握血球计数板的计数方法。二、实验材料：亚心形扁藻、小球藻、叉鞭金藻；三、主要实验仪器和器皿1・显微镜，血球计数板，计数器2•培养瓶(三角瓶)，量筒；四、试剂1•培养液：f/2培养液2•碘固定液五、培养条件：光照强度：1200Lux.温度：20-23°C、盐度：3%、光照吋间：黑暗/光照二12/12六、方法和步骤1、前期准备：各

2、种器皿的消毒、培养液的配制、准备并培养3种不同的海洋微藻：亚心形扁藻、小球藻、叉鞭金藻；2、接种：将不同的实验藻种分别接种到盛有培养液的不同三角瓶(100ml)中，接种的藻容量和新培养液之间的比例为1：2~1：3。培养量与总容量的比小于2/3；3、培养：按上述培养条件进行培养，在培养的过程中，每天摇瓶3次，使藻类充分见接触氧气和光照；4、换代：5-7天换代1次，换代浓度同上；5、固定：将藻液摇匀，用小三角瓶分别倒取一定量(20-30ml)的上述3种藻液加入儿滴碘液，摇匀杀死细胞；6、取样：摇匀后，用吸管吸取上述不同的藻液分别滴到盖有盖

3、玻片的学球计数板的边缘，使藻液慢慢进入盖有盖玻片的区域，避免盖玻片浮起，用吸水纸轻轻吸走多余的藻液，每种藻液取样2次；7、观察计数：显微镜下观察不同的藻种并分别计数。1）血球计数板计数原理血球计数板是一块特制的载玻片，板的中部一型的凹槽，横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网。每个大格：边长为1mm,深为0.1mm,容积为0.lmm3（10ml）□中间大方格为计数室以计数室为中心，对角线两端各有一个有16个中格组成的大格。图I血球计数板A.血球计数板B.划线部分放大■•划线部分b•承娥■玻片部分•b比a*0c•凹沟2）计算藻细胞

4、密度数出对角线上的4个大方格中的总藻数A,若藻液的稀释倍数为B,则计算公式如下：A细胞密度=XBX104（个/ml）4单位：个/ml七、实验结果按下表记录实验数据。实验数据记录表次数各大格中的藻数112342八、思考与讨论用此法计数的结果是活藻体还是死、活菌体的总和?实验二、藻类急性毒性实验藻类是最简单的光合营养有机体，种类繁多，分布很广，是水生生态系统的初级生产者。藻类生长因子包括光照、二氧化碳、适宜的温度、pH值及氮、磷、微量元素等其他营养成分，这些因子的变化会刺激或抑制藻类的生长。在一定环境条件下，如果某种有毒有害的化学物质及其

5、复合污染物进入水体，藻类的生命活动就会受到影响，生物量就会发生改变。所以,通过测定藻类的数量就可以评价有毒有害污染物对藻类生长的影响及对整个水生生态系统的综合环境效应。一、目的：1、在实验一的基础上，掌握藻类毒性试验的方法；2、观察有机磷农药对扁藻的致死效应；3、学会相对增长率（K）的计算方法；3、绘制相对增长率（k）—有机磷农药浓度曲线4、学会使用直线内插法求半数有效浓度（EC50）；二、实验材料1、亚心形扁藻；2、农药：对硫磷；3、培养液：f/2培养液三、实验方法和步骤1、藻种预培养：每96小吋移种一次，2-3次后使藻达到同步生长

6、;2^配制农药：配制lOOppm的农药母液；3、预备实验：预备实验的目的在于探明污染物对藻生长影响的半数有效浓度（ECQ的范围，为正式实验打下基础，其处理浓度的间距可大一些,以便找到值所在的浓度范围。其培养条件均与正式实验相同。4、正式实验：1）培养容器的清洗：三角瓶口覆盖灭菌牛皮纸或2-3层纱布；2）实验浓度的选择：根据预备实验的结果，除对照组外，设计等对数间距的5个污染物浓度，其中必须包含一个能引起实验藻的生长率下降约50%的浓度，并在此浓度上下至少各设计2个浓度。其中每瓶藻液lOOmL（盛在25ml的三角瓶中），每个浓度梯度组有

7、3个平行样，各组的实验条件保持一致；3）培养72hr后，分别取样用碘固定液I古I定，血球计数板计数并计算;四、计算公式k=（IgNt-IgNO）/T培养的起始浓度；培养T时间后的浓度;T：培养时间。五、实验结果记录实验记录表实验藻种名称：藻种编号：标准培养液：被试毒物：实验条件温度：初始测定pH：光照：光暗比：藻细胞数No：通气情况：组别瓶号农药浓度细胞数5平均K值对照123处理I123处理II123处理III123处理IV123处理V123六、根据实验记录，绘制K——C曲线以试验浓度C为横坐标，以K值为纵坐标，绘制K——C曲线;七、

8、求半数有效浓度ECa通过直线内插法，K「的一半所对应的浓度C即为EG。；八、思考与讨论1、实验器皿是否可以用重铭酸钾等洗液洗涤？2、为什么每个实验组要有3个平行样？为什么污染物浓度设计要采用等对数间距的5个浓度？实验三污