2015年CLSI药敏试验标准引入CarbaNP试验.doc

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1、2015年CLSI药敏试验标准引入CarbaNP试验检测碳青霉烯酶我国微生物实验室药敏试验均遵循美国临床与实验室标准化协会（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CLSI）制定的药敏试验标准。CLSI2015年药敏标准（M100-S25）的最大改变之处在于引入CarbaNP试验和流行病学cutoff值的概念。本文将重点推介CarbaNP试验，以供实验室参考。CarbaNP确证试验是一种肠杆菌科、铜绿假单胞菌和不动菌属细菌中碳青霉烯酶的表型检测方法。该试验采用比色法，目前主要用于流行病

2、学研究或感染控制，尚不推荐作为临床常规使用。研究表明，CarbaNP试验在检测KPC、NDM、VIM、IMP、SPM和SME型碳青霉烯酶方面具有较好的敏感性（>90%）和特异性（>90%）。1.CarbaNP试验试剂配制说明（表1）。表1.CarbaNP试验试剂的配制名称配制过程储存10mM七水硫酸锌溶液1)称量1.4gZnSO4×7H2O1年或不超过各成分保质期2)加入500ml试剂级纯水3)混合，室温保存0.5%酚红溶液1)称量1.25g粉红粉末1年或不超过各成分保质期2)加入250ml试剂级纯水3)混合，室温保存4)使

3、用前混匀0.1N氢氧化钠溶液1)将20ml1NNaOH加入180ml试剂级纯水中1年或不超过各成分保质期2)室温保存CarbaNP试剂A溶液1)取25-50ml烧杯，将2ml0.5%酚红溶液加入到16.6ml试剂级纯水中2周或不超过各成分保质期（溶液应为红色或橙色，其他颜色均不可使用）2)加入180ml10mM硫酸锌溶液3)使用0.1NNaOH溶液（或10%HCl）调整pH值为7.8±0.14)4-8℃小瓶保存，避免长时间光照CarbaNP试剂B溶液（A液+6mg/ml亚胺培南）1)计算B液的需要量，需考虑每株待测菌100m

4、l/管、质控菌株和未经处理的试剂质控。如检测两株待测菌，阳性和阴性对照、未经处理的试剂质控，共需500mlB液。最多3天（4-8℃）2)称量约10-20mg亚胺培南粉末。建议至少称量10mg粉末。将实际称重量除以6，以计算所需加入的A液量。2.CarbaNP试验的结果解读（图1）图1.管“a”（A液未加亚胺培南）和管“b”（B液加入亚胺培南）的颜色反应比较结果解释：管“a”：溶液A（作为内质控）管“b”：溶液B结果解释红色或红-橙色红色或红-橙色阴性，非碳青霉烯酶产生株红色或红-橙色浅橙色、深黄色或黄色阳性，碳青霉烯酶产生株

5、红色或红-橙色橙色无效橙色、浅橙色、深黄色或黄色任何颜色无效3.检测碳青霉烯酶的试验比较见表2表2.用于流行病学研究或感染控制目的检测碳青霉烯酶相关试验的比较改良Hodge试验CarbaNP试验其他(如分子检测)细菌对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌属对1种或1种以上碳青霉烯类不敏感的肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌属是否产生碳青霉烯酶；检测改良Hodge试验和CarbaNP试验阳性菌株的碳青霉烯酶类型。优势易于操作；无需特殊的试剂或培养基

6、快速除检测是否产生碳青霉烯酶外，亦可检测碳青霉烯酶类型局限性1)假阳性：产生ESBL或AmpC酶合并孔蛋白缺失的菌株；2)假阴性：偶尔出现（产NNDM金属酶菌株）；3)仅用于肠杆菌科细菌1)需要特殊的试剂；2)某些菌株检测结果无效；3)无法检测某些碳青霉烯酶（如染色体编码的OXA型碳青霉烯酶）1)需要特殊的试剂和仪器；2)只对靶基因特异；3)对未检测的特异性碳青霉烯酶基因可出现假阴性