海栖热袍菌两种焦磷酸硫胺素依赖型酶的研究.pdf

《海栖热袍菌两种焦磷酸硫胺素依赖型酶的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、；５５９学校代码分类号Ｑ；１０６９７密级：公开学号；２０１２２０８８４Ｉ衣批乂聲ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ破±亨应巧交ＭＡＳＴＥＲ＇ＳＤＩＩＳＳＥＲＴＡＴＯＮ海栖热袍菌两种焦辦酸硫胺素依赖型酶的研究学科若称：生物化学与分子生物学作者：起继奎指导老师：高文运教授西北大学学位评定委员会二〇—五年西北大学学位论文知识产权声明书本人完全了解西北大学关于收集、保存、使用学位论文的规定。学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论

2、文被查阅和借阅。本人授权西北大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。、、ｔ指导教师签名学位论文作者签名：杉伯；■年４月日方？《年《月／／日西北大学学位论文独创性声明本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地

3、方外，本论文不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西北大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：赵化全／年《月■Ｔ日海栖热袍菌两紳焦磯酸硫胺素化赖型酶的硏究摘要生物体内的多种酶促反应需要焦磯酸硫胺素（ＴｈＤＰ）作为辅酶，由于送类酶促反应中的酶在发挥作用时必须依赖于ＴｈＤＰ，因此将送类酶称为ＴｈＤＰ依赖型酶。乙酷乳－－－Ｄ－５憐酸合酶（ＤＸＳ）都属于ＴｈＤＰ依赖型酶酸合酶（

4、ＡＨＡＳ）和レ脱氧木厕糖。一该酶存在于细菌，酵母及ＡＨＡＳ是支链氨基酸生物合成途径中第步反应的限速酶，、。植物中，因此ＡＨＡＳ成为ＤＸＳ，不存在于动物及人体中筛选抗菌素除草剂的铅标一－－－－４－磯酸是２甲基Ｄ赤蘇糖醇（ＭＥＰ）荫类化合物生物合成途径的第个关键酶，该途径存在于细菌、追原虫及植物的质体中，动物及人体中不存在，因此ＤＸＳ也可Ｗ作为新型抗菌素、抗追药物的筛选祀标。ＤＮＡ为模板－本实验Ｗ海栖热袍菌的全基因组，构建了两个表达质粒ｐＥＴ２８ａＴｍＡＨＡＳ、ＥＴ２８ａ－ＴｍＤＸＳｆｓｅａ，分别导入

5、￡．ｃｏ／ＲｏｔｔＤＥ３中，诱导表达了ｐ（）ＴｍＡＨＡＳ、ＴｍＤＸＳ两种融合蛋白。ＴｍＡＨＡＳＷ部分可溶性形式表达，分离纯化后测定了酶的活性、稳态动力学参数、稳定性及湿度、Ｈ、时间对活性的影响。结果表ｐ胃ｔｅ化ＴｍＡＨＡＳ的爲严为ｉｇ．ｌｌｍＭ，比活力为１３．４Ｕ／ｍｇ，最适反应湿度、ｐＨ、时°Ｃ－间分别为８０，７．０４５ｍｉｎ。５０ｍＭＰｈｏｓｈａｔｅｂｕｆｅｒ（Ｈ７．０，２０％），在ｐｐ甘油中，’８０Ｃ４８０％。ＴｍＡＨＡＳ保存个月后活性仍达活性抑制实验表明，氯横隆与

6、氯唆賴隆对的ＩＣ５ｏ分别为１．４９ｌＭ、８８．８ｎＭ。此外，ＴｍＡＨＡＳ还可催化丙雨酸与苯甲酸反应生成＾一医药工业中用于生产ｏ－以苯基乙爾甲醇（心口八０该／ｐ肾上腺素的重要前体物质。因此，ＴｍＡＨＡＳ不仅可Ｗ作为良好的抗菌药物的筛选祀标，还可用于手性药物的合成。而表达的重组蛋白ＴｍＤＸＳ全Ｗ包涵体形式存在，经过变性复性处理，得到了可溶性的ＴｍＤＸＳ且活性良好，可Ｗ用于抗苗素的筛选。综上所述，这两种ＴｈＤＰ依赖性酶都‘０－９０Ｃ）特性可用于抗菌素的筛选，同时由于这两种酶具有耐离温（７，它们在工业生产中还

7、具有潜在的应用前景。关键词海栖热袍茵，ＴｈＤＰ依赖型酶，纯化，酶活性，抑制剂ＩＴｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｗｏｔｈｉａｍｉｎｅｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｎｚｙｍｅｓｏｆＴｈｅｒｍｏｔａｇａｍａｒｉｔｉｍｅＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｉａｍｉｎｅｒｏｈｏｓｈａｔｅＴｈＤＰｐａｒｔｉｃｉａｔｅｓｉ打ａｖａｒｉｅｔｏｆｅｎ之ｙｍａｔｉｃｒｅａｃｔｉｏ打ｓｉｎｖｉｖｏａｓｐｙｐｐ（）ｐｙａｎｎｄｉｓｅｎｓａｂｌｅｃｏｅ打ｚｍｅ．Ｔｈｅｅｎｚｍｅｓ

8、ｃａｔａｌｚｉｎｔｈｅｓｅｓｏｒｔｓｏｆｒａｃｔｉｏ打ｓａｒｅｔｈｅｒｅｆｏｒｅｉｐｙｙｙｇ－－Ａｃｅｔｏ－－－ＴｈＤＰｄｅｐｅｎｄｅ打ｔｅｎｚｙｍｅｓ．ｌａｃｔａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ（ＡＨＡＳ）ａｎｄ１ｄｅｏｘｙＤｘｙｌｕｌｏｓｅ５－ｐｈｏｓｐｈａｔ