Mabselectsure在位清洗寿命性能.pdf

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1、GEHealthcareLifeSciences应用文献28-9872-96AA亲和层析在MabSelectSuRe™LX的反复在位清洗期间的寿命性能研究本文评估了一种用于捕获单克隆抗体的碱ProteinA亲和层析在上样前也需要最低限稳定性的、ProteinA来源的亲和层析介质度的调节层析条件，并允许快速工艺转化到（树脂）MabSelectSuReLX经过包括0.1稳定的工艺中间步骤。M氢氧化钠在位清洗的100个纯化循环后基于proteinA配体的MabSelect™家族的亲的性能。结果显示，它的动态结合载量可以和层析层析介质已经被生物制药单克隆抗保持，而且在整个研究中产量不变。配体密体的

2、大规模商业化厂商所广泛接受。这种层度也保持不变。此外，脱落的proteinA和析介质已经被扩展以满足大规模生产的发宿主细胞蛋白的水平几乎保持不变。利用更展需要。MabSelect™家族最近的一个新成员高浓度氢氧化钠的扩展实验证实了其良好是MabSelectSuReLX，它是与MabSelect的稳定性。这些数据表明，MabSelectSuReSuRe具有相同硬度的高流速琼脂糖基质和LX可以在生产规模的纯化中被反复使用，碱稳定性配体。这种配体能够耐受利用0.1并在长期的工作寿命中提供满足预定质量或0.5M氢氧化钠（NaOH）的苛刻CIP和和安全标准的产品。消毒程序。然而，与MabSelect

3、SuRe相比，MabSelectSuReLX在稍长的停留时间（例介绍如6到10分钟）下提供20%到50%的更高的动态结合载量。对于单克隆抗体（MAbs）作为生物药物的需求日益增加已经促进了具有非常高表达本应用文献介绍了一项研究，以定量水平的细胞培养的发展。在过去的20年来，MabSelectSuReLX在使用0.1或0.5M哺乳动物细胞培养的抗体表达量已经急剧NaOH在位清洗（CIP）的反复纯化循环中上升。今天我们通常可以看到5到10g/l的长期的层析性能。测定的参数包括动态结合表达量，而且已经有高至15g/l或更高的表载量、抗体产量和脱落的proteinA和宿主细达水平的报道。对于能够应

4、付这种提高的纯胞蛋白（HCP）的水平。化工艺的需求也已经相应地升高。单克隆抗体的大规模纯化通常由两个或三材料与方法个层析步骤组成，而proteinA亲和层析介质利用含有单克隆抗体原料和0.1M通常是用作初始捕获的首选，因为它们在一NaOH用于CIP的常规寿命研究步中提供高纯度（>99%）和高产量。MabSelectSuReLX被装填在Tricorn™5/100层析柱中（床高度10cm，柱体积1.96ml）。然后，层析柱经过含有0.8g/l单克隆抗体的澄清的、收获的细胞培养液（HCCF）的反复循环。人多克隆IgG（hIgG）被用于测定10%穿透（DBC，10%穿透）时的动态结合载量。停留时间

5、为4或6分钟。表1概述了这个计划。1

6、28-9872-96AA吸附的抗体被5个柱体积的0.1M柠檬酸，HCP去除和proteinA脱落pH3.0洗脱。在每个洗脱循环后利用0.1M上样样品到最终上样量80%的DBC，10%NaOH（接触时间15分钟）进行在位清洗。穿透。在洗掉未结合的物质后，用0.1M柠檬酸，pH3.0进行洗脱，每1ml组分被收表1.利用0.1MNaOH用于最初的MabSelectSuRe集在含有0.1ml1MTris,pH9的管中。然后LX性能寿命研究的计划用0.1MNaOH进行CIP，最后用PBS重新††循环上样*停留时间循环数上样*停留时间平衡。数(分钟)(分钟)‡1h

7、IgG4和652hIgG4使用商品化的抗CHOHCP抗体（Cygnus2hIgG453空白4TechnologiesInc.USA）测定HCP水平。基3HCCF454hIgG6本上，使用GyrolabBioaffy™20HC微型实5空白460hIgG4验室光盘把一种ELISA方法改变为10hIgG461HCCF4Gyrolab™WorkstationLIF(GyrosAB,11HCCF462空白4Uppsala,Sweden)。使用一种商品化ELISA12空白472hIgG420hIgG483hIgG4试剂盒(RepligenCorp.,Waltham,MA,USA)21HCCF492hI

8、gG4测定MabSelectSuReLXproteinA配体的脱22空白497HCCF4落。32hIgG498空白441hIgG499hIgG4利用0.1或0.5MNaOH的反复循环的42HCCF4100hIgG6碱稳定性研究*所有剩余的周期：HCCF（收获的细胞培养液）应MabSelectSuReLX被装填在Tricorn5/100用于80%的DBC，在4分钟停留时间时10%穿透，层析柱中，经受5个柱体积（CV）PBS