哺乳动物(人)性别决定基因实验.pdf

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1、哺乳动物（人）性别决定的基因分析实验一、实验原理哺乳动物的性别鉴定子生产生活中具有广阔的应用前景，特别是胚胎的早期性别鉴定；在基础研究方面也有重要作用，如动物细胞培养中的性别鉴定筛选。1990年SRY(SexdeterminingRegionY)基因的发现是人类性别决定领域的重大突破。SRY基因，雄性的性别决定基因，指Y染色体上具体决定生物雄性性别的基因片段。人的SRY基因位于Yp11.3，只含有一个外显子，没有内含子，转录单位长约1.1kb，编码一个204氨基酸的蛋白质。自SinclairtJ从

2、Y短臂上的1A1区域分离出SRY基因以来，已有大量证据表明SRY在性别决定及分化过程中起着非常重要的作用，是人类睾丸决定因子（testisdeterminingfactor,TDF）的最佳候选基因。2003年6月19日，佩基实验室和华盛顿大学基因测序中心的合作者们，发表了Y染色体DNA序列及其分析，其中很多有趣和重要的发现。Y染色体测序结果也许是迄今为止人类基因组测序中最有趣的。我们知道一些遗传病与性别有一定的关系，例如Y连锁遗传病中的外耳道多毛症，这种病只发生在男性身上，如能及时检测出SRY基因

3、则能很好的避免悲剧的发生，减少家庭及社会的负担，因此探索SRY基因对医学、遗传学、优生学、动物育种学、法医学等领域的研究和应用具有重要意义。二、实验材料带毛囊的头发三、器材与药品台式高速离心机、PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电源系统、凝胶成像系统、各种常规移液器、0.2mlEP管。第一次PCR引物primer1（片段长度299bp）：上游引物（2701）：5-CTAAGTATCAGTGTGAAACGGG-3下游引物（2002）：5-ATTCTTCGGCAGCATCTTCGC-3巢式PCR引物primer

4、2（片段长度252bp）：上游引物（2702）：5-ACAGTAAAGGCAACGTCCAGG-3下游引物（2001）5-CCTTCCGACGAGGTCGATAC-3PCRmix、琼脂糖、EB、TAE、0.2MNaOH、0.04MHCL、DNAmarker、ddHO2四、实验步骤1、DNA的准备1）2个Ep管中分别加入20ul0.2MNaOH溶液。2）取男性和女性带毛囊的头发各7根，剪出毛囊部分，用镊子分别转移至Ep管中。03）PCR仪中设置温度，75C30min。4）各加入500µl0.04MH

5、CL中和。5）12000rpm离心5min，取出上清液。2、PCR反应体系（25µl）PCRmix12.5µlP1µl1P1µl2DNA2µlddHO8.5µl2注：巢式PCR的模板为第一次PCR的产物。3、PCR反应条件：0000095C7min；95C30s；52C30s；72C1min；35cycle；72C10min。注：二次PCR反应条件一样。4、1%琼脂糖电泳检测五、实验结果