狂犬病病毒不同毒株的生物学特性研究.pdf

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1、中国病毒病杂志２０１４年７月第４卷第３期ＣｈｉｎＪＶｉｒａｌＤｉｓ，Ｊｕｌｙ２０１４，Ｖｏｌ．４Ｎｏ．３·１７９··论著·狂犬病病毒不同毒株的生物学特性研究汤重发，俞永新，刘景华，曹守春，石磊泰，李加，吴小红，王云鹏，董关木，李玉华中国食品药品检定研究院虫媒病毒疫苗室，北京１０００５０摘要：目的研究狂犬病不同固定毒株对动物的致病性和对细胞的感染性。方法以小鼠脑内和肌内途径接种比较不同毒株的致病性，研究并建立ＨＥＰＥＳ（４－羟乙基哌嗪乙磺酸）诱导的空斑形成技术测定病毒空斑形成单位（ｐｌａｑｕｅ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＰＦＵ）和细

2、胞病变感染技术测定病毒感染滴度（ＣＣＩＤ５０），并用以比较不同毒株的病毒滴度，实验同时以常规的直接免疫荧光法（ｄｉｒｅｃｔｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｓｓａｙ，ｄＦＡ）做对照。结果不同固定毒株对１０～１２ｇ小鼠的脑内致病力普遍很高，但肌内毒力普遍较低，脑腔感染致病力比肌内感染致病力高３．０～５．０ｌｇＬＤ５０，ＣＶＳ株相差最大为５．０ｌｇＬＤ５０。用两种新的方法（ＰＦＵ和ＣＣＩＤ５０）测定不同毒株的病毒滴度与ｄＦＡ法测定的结果比较，除个别株外无明显差异，如ＣＶＳ－１１、４ａＧ、ＰＶ株用三种方法测定的滴度均在７．１～７．９

3、ｌｇ。结论用ｄＦＡ法测定病毒滴度的结果与小鼠脑内测定的结果有可比性，用以替代小鼠脑内法测定病毒滴度是可行的。两种细胞感染法测定的病毒滴度操作简便，无需贵重仪器和昂贵试剂，可以更广泛地应用于狂犬病病毒和疫苗发展的研究。关键词：狂犬病病毒；细胞病变；蚀斑形成；４－羟乙基哌嗪乙磺酸（ＨＥＰＥＳ）中图分类号：Ｒ３７３．９文献标识码：Ａ文章编号：２０９５－０１３６（２０１４）０３－０１７９－０８ＴｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｒａｉｎｓｏｆｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓＴＡＮＧＣｈｏｎｇ－ｆａ，Ｙ

4、ＵＹｏｎｇ－ｘｉｎ，ＬＩＵＪｉｎｇ－ｈｕａ，ＣＡＯＳｈｏｕ－ｃｈｕｎ，ＳＨＩＬｅｉ－ｔａｉ，ＬＩＪｉａ，ＷＵＸｉａｏ－ｈｏｎｇ，ＷＡＮＧＹｕｎ－ｐｅｎｇ，ＤＯＮＧＧｕａｎ－ｍｕ，ＬＩＹｕ－ｈｕａＤｉｖｉｓｉｏｎｏｆＡｒｂｏｖｉｒａｌＶａｃｃｉｎｅｓ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５０，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＹＵＹｏｎｇ－ｘｉｎ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｕｙｏｎｇｘｉｎ＠ｎｉｃｐｂｐ．ｏｒｇ．ｃｎＡｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｔ

5、ｕｄｙｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｓｔｒａｉｎｓｉｎｍｉｃｅａｎｄｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＭｉｃｅ（１０－１２ｇ）ｗｅｒｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌｌｙｏｒｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｌｙｗｉｔｈｓｉｘｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｖｉｒｕｓｓｔｒａｉｎｓ，ａｎｄｏｂｓｅｒｖｅｄｔｈｅｍｏｒｔａｌｉｔｙｗｉｔｈｉｎ１４ｄａｙｓ．ＨＥＰＥＳｅｎｈａｎｃｉｎｇｐｌａｑｕｅａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｖｉ－ｒｕｓｐ

6、ｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ（ＰＦＵ），ａｎｄｔｈｅＣＰＥｓｔａｉｎｅｄａｓｓａｙｔｏｍｅａｓｕｒｅＣＣＩＤ５０ｉｎＢＨＫ－２１ａｎｄＶｅｒｏｃｅｌｌｓ．ＴｗｏｎｅｗｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｒｏｕｔｉｎｅｄＦＡａｓｓａｙ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｌｌ６ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｈｉｇｈｌｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｔｏｔｈｅｍｉｃｅｂｙｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｂｕｔｗｅａｋｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂｙｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｉｎｏｃｕｌａ－ｔ

7、ｉｏｎ．Ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｗａｓ３．０－５．０ｌｇＬＤ５０ｗｈｉｃｈｉｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｉｎｔｒａｍｕｓ－ｃｕｌａｒｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｄＦＡａｓｓａｙｗａｓｃｏｍｐａｒａｂｌｅｔｏｔｈａｔｒｏｕｔｉｎｅｌｙｕｓｅｄｆｏｒｖｉｒｕｓｔｉｔｒａｔｉｏｎｉｎｖａｃｃｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙｔｅｓｔｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｎｅｗｍｅｔｈｏｄｓ，ＰＦＵａｎｄＣＰＥ，ｗａｓｃｏｍｐａｒａｂｌｅｔｏｔｈａｔ

8、ｏｆｔｈｅｒｏｕ－ｔｉｎｅｌｙｕｓｅｄｄＦＡｍｅｔｈｏｄ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅｄＦＡｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｔｈｅｍｏｕｓｅｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌｉｎｏｃ－ｕｌａｔｉｏｎｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｔｉｔｒａｔｉｏｎｏｆｖ