pMD18-19_T_载体图谱.pdf

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1、pMD18-TVectorD101A1mg500元pMD19-TVectorD102A1mg500元pMD18-TVector、pMD19-TVector是一种高效克隆PCR产物(TACloning)的专用载体。这两种载体分别由pUC18、pUC19载体改建而成，在pUC18、pUC19载体的多克隆位点处的XbaI和SalI识别位点之间插入了EcoRV识别位点，用EcoRV进行酶切反应后，再在两侧的3'端添加"T"而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的3'末端添加一个"A"的特性，所以使用这两种制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆

2、效率。PCR产物克隆系列载体由于这两种载体是分别以pUC18、pUC19载体为基础构建而成，所以它具有同pUC18、pUC19载体相同的功能。此外，这两种制品中的高效连接液LigationMix可以在极短时间内(约5分钟)完成连接反应，且此连接液可以直接用于细菌转化，大大方便了实验操作。制品中的ControlInsert(500bp)还可以用于Control反应。pMD19-TVector与pMD18-TVector相比，pMD19-TVector的b-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。因此，克隆后更容易进行克隆体的蓝白筛选

3、。pMD18-T&pMD19-TVector的结构rpmIAacZpMD18-T&pMD19-TVectorEcoRVT-CloningSite(2,692bp)OPpMD18-TVectororiTMBcaBESTSequencingPrimerRV-MGAGCGGATAACAATTTCACACAGGXmaIHincIISmaIAccISse8387IlacZEcoRISacIKpnIBamHIXbaIEcoRVSalIPstISphIHindIIIGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGAATTCGAG

4、CTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGATATCGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGDigestedbyEcoRVCAGCACTGACCCTTTTGGGACCGCBcaBESTTMSequencingPrimerM13-47...tctagagatTatcgtcgacc...(T-CloningSite)pMD19-TVector...agatctctaTtagcagctgg...TMBcaBESTSequencingPrimerRV-MGAG

5、CGGATAACAATTTCACACAGGHincIISse8387IAccIXmaIlacZHindIIISphIPstISalIEcoRVXbaIBamHISmaIKpnISacIEcoRIGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACGATATCTCTAGAGGATCCCCGGGTACCGAGCTCGAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGDigestedbyEcoRVCAGCACTGACCCTTT

6、TGGGACCGCBcaBESTTMSequencingPrimerM13-47...gtcgacgatTatctctaga...(T-CloningSite)...cagctgctaTtagagatct...■制品内容4）全量（10ml）加入至100mlJM109感受态细胞中冰中放置30分钟。pMD18-TorpMD19-TVector(50ng/ml)20ml×1支5）42℃加热45秒钟后，再在冰中放置1分钟。PCR产物克隆系列载体ControlInsert(50ng/ml)10ml×1支6）加入890mlSOC培养基，37℃振荡培养60分钟。Ligati

7、onMix*30ml×5支7）在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板培养基上培养，形成单菌落。计数白色、蓝色菌落。*使用时请于冰中融解。8）挑选白色菌落，使用PCR法确认载体中插入片段的■保存长度大小。-20℃B.结果■纯度使用ControlInsert时的连接/转化结果如下，使用的感受ControlInsert经克隆后的白色菌落中，有90%以上含有Insert态细胞的转化效率为：1.5×108cfu/mgpUC19DNA。DNA片段。ControlInsert经克隆后，用双脱氧测序法确认多克隆酶切Control连接/转化效率白色菌落比率效率位点及T

8、碱基的存在。Insert(cfu/mg