三疣梭子蟹球状病毒的人工感染与纯化【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）三疣梭子蟹球状病毒的人工感染与纯化目录1引言22材料和方法22.1材料、试剂、设备22.1.1材料22.1.2试剂22.1.3仪器、耗材32.2方法32.2.1蟹病毒人工感染32.2.2病蟹组织超薄切片制作与观察32.2.3由蟹病组织纯化病毒32.2.4纯化病毒的负染、电镜观察43结果与分析43.1人工感染后三疣梭子蟹病症43.2病蟹组织超薄切片的电镜观察43.3由病蟹组织纯化病毒43.4病毒致病性（致死性）验证64讨论64.1病毒纯化方法64.2病毒的致病性6致谢8参考文献8摘要：由宁波沿海采集患病三疣梭子蟹，匀浆后过滤，制备病毒匀浆液注射到健康梭子蟹中，同时设置

2、PBS注射对照组。结果为实验组全部死亡，对照组无死亡情况。证实此前在自然感染组织中观察到的球状病毒对三疣梭子蟹具有强感染力，并且致死性较强。采用差速离心法，由患病三疣梭子蟹组织纯化病毒，对纯化的病毒进行负染、电镜下观察，结果表明获得了较纯净的病毒粒子，根据该病毒的形态、大小，此病毒疑似呼肠孤病毒。纯化的病毒感染健康梭子蟹，实验组全部死亡，证实纯化后病毒完整并且有活力，纯化方法有效。关键词：三疣梭子蟹；人工感染；纯化Abstract:窗体顶端请键入文字或网站地址，或者上传文档。Abtracts:SickPortunustrituberculatusspecimenswerecollectedf

3、romcoastalofNingbo.Infectedtissueswerehomogenated.Afterfilteration,thevirushomogenatewasinjectedintohealthycrab.ControlcrabgroupwasinjectedwithPBS.Asaresult,theexperimentalgroupwerealldiedwhilenodeathappearedinthecontrolgroup.ItconfirmedthatthesphericalvirushasstronginfectiousandlethaleffecttoP.tri

4、tuberculatus.Theviruswerepurifiedfrominfectedcrabtissuesbymulti-stepdifferentialcentrifugation.Thepurifiedvirusparticleswerenegativestained.Observedunderelectronmicroscopt,therearemanypurifiedvirus.Accordingtotheshapeandsizeofthevirus,itwassuspectedtoreovirus.Infectedhealthycrabwithpurifiedvirus,th

5、eexperimentalgroupwasalldiedwhichconfirmedthatpurifiedviruswascompleteanddynamic,thepurificationmethodiseffective.显示对应的拉丁字符的拼音Keywords:Portunustrituberculatus;Artificialinfection;Purification81引言三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)隶属于甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、梭子蟹科(Portunidae)，广泛分布于我国沿海，是一种经济价值较高的大型海产经

6、济蟹类[1]。三疣梭子蟹味道鲜美，营养价值极为丰富，是人们非常喜爱的水产品之一，同时也是很重要的出口品种，已逐渐成为我国海水养殖的主导品种之一。浙江省沿海地区养殖业发展迅速，宁波市一带短短几年内就发展成了全国闻名的梭子蟹养殖基地。随着三疣梭子蟹养殖业的快速发展，养殖密度不断增加，养殖规模不断扩大，又因为它受到海洋环境的污染、养殖生产自身所带来的污染、养殖技术水平等多方面的原因制约，三疣梭子蟹在养殖的过程中病害问题日趋突出[2]。各类疾病的发病率和危害程度有逐年上升的趋势，并呈现出大规模发生和暴发性流行的趋势。由于对病原不了解而盲目用药，导致药物滥用，不但提高了水产养殖的投入产出比，危害水产养

7、殖业者的经济利益，而且打击了消费信心，影响到出口内销，严重困扰着梭子蟹水产养殖业的健康发展［3］。另外由于一些虾蟹综合养殖的推广，一些广宿主病毒如白斑综合症杆状病毒等也成为侵害三疣梭子蟹的病原体。三疣梭子蟹产业化人工养殖中，病害防治作为其最核心的环节，往往被养殖者所忽视，蟹类病毒性病原研究更是极其薄弱［4］。国内外已报道的蟹类病毒有：水生呼肠孤病毒[5]、微核糖核酸病毒、蓝蟹疱疹病毒、蓝蟹螺旋病毒、河蟹颤抖病