双缩脲反应

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1、双缩脲反应biuretreaction蛋白质在碱性溶液中与硫酸铜作用形成紫色络合物的呈色反应。在540nm波长处有最大吸收。可用于蛋白质的定性和定量检测。　　  紫色络合物分子结构式在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）能与铜离子（Cu2+）作用，形成紫色络合物（该物质的分子结构式见图），该反应即双缩脲反应。　　双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应。一般分子中含有两个氨基甲酪基（即肽键：-CO-NH-）的化合物与碱性铜溶液作用，就会形成紫色或蓝紫色络合物。　　注：除-CO-NH-有此反应外，（-CONH2-）、（-CH2-）

2、、（-NH2-）、（-CS-CS-NH2）等基团亦有此反应。双缩脲反应的鉴定　　由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应，且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关，故可用双缩脲法测定蛋白质的含量（借助分光光度计可减小误差）。　　双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在

3、性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如Tris缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。配制双缩脲试剂的注意事项　　双缩脲试剂由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO4溶液（0.01g/mL）配制而成，配制比例为5:1。但是双缩脲试剂不用现配现用，这是与斐林试剂不同的地方之一！BiurettestThecharacteristiccolorofapositivebiurettestThebiurettestisachemicaltestusedfordetectingthepresenceofpeptidebonds.Inthepresenceofpe

4、ptides,acopper(II)ionformsaviolet-coloredcomplexinanalkalinesolution.[1]Severalvariantsonthetesthavebeendeveloped.TheBiuretreactioncanbeusedtoassaytheconcentrationofproteinsbecausepeptidebondsoccurwiththesamefrequencyperaminoacidinthepeptide.Theintensityofthecolor,andhencetheabsorptionat540

5、 nm,isdirectlyproportionaltotheproteinconcentration,accordingtotheBeer-Lambertlaw.Inspiteofitsname,thereagentdoesnotinfactcontainbiuret((H2N-CO-)2NH).Thetestissonamedbecauseitalsogivesapositivereactiontothepeptidebondsinthebiuretmolecule.[edit]ProcedureAnaqueoussampleistreatedwithanequalvol

6、umeof1%strongbase(sodiumorpotassiumhydroxidemostoften)followedbyafewdropsofaqueouscopper(II)sulfate.Ifthesolutionturnspurple,proteinispresent.5–160 mg/mlcanbedetermined.[edit]BiuretreagentThebiuretreagentismadeofpotassiumhydroxide(KOH)andhydratedcopper(II)sulfate,togetherwithpotassiumsodium

7、tartrate.Thereagentturnsfrombluetovioletinthepresenceofproteins,bluetopinkwhencombinedwithshort-chainpolypeptides.[2]Notallbiurettestsrequirethebiuretreagent.Thereagentiscommonlyusedinabiuretproteinassay,acolorimetricassayusedtodetermineproteinconcentrat