第51课时DNA的粗提取与鉴定通案

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1、北大附中河南分校高二生物教学通案课题：选修1专题5课题1DNA的粗提取与鉴定领导签字：时间：13年5月30日星期序号：51备课人：楚素霞教学目标：本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质，理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理。教学重点•难点课题重点：DNA的粗提取和鉴定方法。课题难点：DNA的粗提取和鉴定方法教学活动一、情景导入（1分钟）从今天开始，我们学习牛物化学成分的提取与改造技术。DNA和蛋口质技术，包括DNA的提取、蛋白质的提取、DNA片段的扩增等，是开展分子生物学硏究的基本技术。本节知识要点是DNA

2、的物理化学性质，尤其是DNA的溶解性；及二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。二、自主预习（8分钟）实验原理DN>rf<米LDNA在不同浓度NaCl溶液屮溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精屮溶解度不同DNA和蛋白质对卿、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应鉴定DNA学生活动三、教师精讲（10分钟）棊础知识：1.1DNA粗提取的原理提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐受性两个方面。问：提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？1.1.1分析图5-loDNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度冇何特点？耍使DNA溶解

3、，需要使用什么浓度？^tliDNA析出，又需要使用什么浓度？1.2在溶解细胞中的DNA时,人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分了析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液屮缓慢注入蒸懈水，以稀释NaCl溶液。酒精是一种常用冇机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特补充。备注1.2DNA在不同浓度NaCl溶液屮溶解度不同；DNA不溶于酒精。1.1.14在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。1.1.24将DNA和蛋白质进一步分离。1.1.3金蛋白酶,因为酶具有专一性，蛋白臨只水解蛋白质而不会对

4、DNA产牛影响。温度值为60〜80°C,因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会1.1.3♦洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。1.2套在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。2.1."哺乳动物的血液和液体培养基屮的大肠杆菌。别是95%冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么冃的？1.1.3提取DNA还可以利用DNA对酚、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？补充：DNA的变性是指DNA分了在高温下解螺旋，其温度在80°C以上,如在PCR技术中DNA变性温度在95°

5、C□思考：观察图5・2,洗涤剂在提取DNA中有何作用？1.2DNA的鉴定原理当鉴定捉取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？原理总结。通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA,可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒梢进一步将DNA与蛋口质分离开来，达到提纯的口的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。2.实验设计2.1实验材料2.1.1不同生物的组织屮DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含虽高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA?2.1.2从核DNA数目來看，猪38条，鸡78条，

6、哺乳动物血0条，扌弥猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，人肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。鸡血、獗猴桃。2.2破碎细胞，获取含DNA的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？在以上实验中，加入蒸係水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。血细胞在蒸锚水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤。在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产牛什么结果？具体做法。10mL鸡血+20mL蒸懈水一同方向搅拌一3层尼龙布过滤一滤液2.3去除滤液中的杂质最

7、初获得的DNA滤液含存蛋H质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNAo阅读教材捉供的三种方法，分析具中的原理。方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液屮溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。具体做法。方案一：30mL滤液+35gNaCl-同方向搅拌，DNA溶解〜加入蒸饰水一DNA析出-过滤得到过滤物一放到2mol/LNaCl溶液中溶解-DNA-NaCl溶解液方案二：30mL滤液+嫩肉粉（木瓜蛋口酶）一静置10〜15分钟一DNA滤液方案三：30滤液一60〜67°C处理一过滤获得DNA滤液

8、2.4DNA析出与鉴定在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置2〜3分钟，析出的白色丝