《蛋白质盐析实验条件的探究》

《《蛋白质盐析实验条件的探究》》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、蛋白质盐析实验条件的探究黄秋静广西师范大学化学与药学学院桂林摘要对影响蛋白质盐析的实验条件进行了探究。认为其中三个主耍影响因素为:鸡蛋清溶液的浓度、盐溶液种类、酸的加入顺序，最终总结得出蛋白质盐析实验的适宜条件。关键字蛋口质盐析实验条件InquiryexperimentconditionsofproteinsaltingoutHuang-QiujingSchoolofchemistryandpharmacy,GuangxiNormalUniversity.Guilin,ChinaAbstract:Theexperimentalcon

2、ditionsaffectingproteinsaltingoutoftheresearch.Thethrccmainfactors:theeggwhitesolutionconcontration,saltsolutiontype,acidadditionorder,final1ysummarizessuitableconditionsofproteinsaltingoutexperiment.Keyword：proteinsaltingoutexperimentcondition1引言在蛋白质溶液中加入一定浓度的强电解质盐，如（

3、NHJ2S04等，蛋白质从溶液屮析出，这种作用称为盐析蛋白质盐析是高屮阶段的重要演示实验，但实际操作中常常不能出现沉淀。盐析作用的实质是高浓度的强电解质破坏蛋口质分子表而的水化膜，同时电解质离子屮和了蛋白质所带的电荷，蛋白质的稳定因素被消除，使蛋白质分了相互碰撞而凝聚沉淀⑵。蛋口质的溶解性受所带电荷和溶液离子强度的影响，而蛋白质所带电荷与溶液的pH有关，溶液离子强度与强电解质的无机盐自身性质有关。因此木文通过改变影响蛋白质溶解性的三个主要因素：鸡蛋清溶液的浓度、盐溶液种类、酸的加入顺序等进行蛋口质盐析实验的探究，以期寻找盐析实验的最

4、佳反应条件。2实验内容及结果讨论表1相同盐溶液在不同浓度的鸡蛋清溶液中的盐析不同浓度的鸡蛋清溶液体积2mL纯鸡蛋清溶液过滤后的鸡蛋清液V（纯鸡蛋清）:V（蒸馆水）=1:2V（纯鸡蛋清）：V（蒸镭水）=1:4V（纯鸡蛋清）:V（蒸憾水）=1:6饱和硫酸鞍的滴数4滴出现沉淀，10滴明显4滴出现沉淀，10滴明显17滴出现沉淀，25滴明显20滴出现沉淀,25滴明显20滴出现沉淀（振荡后消失），30滴明显复原时加入蒸憾水体积（与饱和盐溶液和蛋淸液总体积相对比）3倍体积3倍体积3倍体积3倍体积3倍体积注：鸡蛋清液过滤时选用浸湿再拧干的纱布叠成4

5、层放入漏斗中过滤。过滤后黏在纱布上的物质弃之不用。实验表明，纯鸡蛋清液和过滤后的鸡蛋清液盐析实验效果最好，但纯鸡蛋清液加水复原时出现分层，过滤后的鸡蛋清液盐析效果更好。鸡蛋清中的蛋白质主要有卵清蛋白，卵黏蛋白，伴清蛋片等，其中卵清蛋白，伴清蛋白溶于水、稀酸和稀碱，而卵黏蛋白彳、易溶于水。因此，需要把不易溶于水的卵黏蛋白过滤掉,加水后才不会出现分层。2.2盐的种类对盐析的影响表2不同饱和盐溶液在过滤后的鸡蛋清液中的盐析饱和盐溶液种类(NH4)2sojNH4C1Na2S04NaClMgSOi饱和盐溶液pH4-55-6777产生沉淀时滴加

6、的滴数750505050现象沉淀明显半个小时后略有沉淀半个小时后无沉淀略有浑浊略有浑浊加入蒸憎水后现象3倍体积蒸他水，复原3倍体积蒸憎水，复原注：每组实验所用鸡蛋清液都经过滤但没加蒸馅水；表2买验在室温19°C下进行。离了强度与离了浓度、离了所带电荷有关。从盐的溶解度表中可以看出，20°C时，（NH4）2S04的溶解度最大，NH4C1,NaCl,MgS04-7H20的溶解度近似相等,冃他们的溶解度都随温度变化不大；RasoMj溶解度随温度变化最大。此外，一般来说，二价离了（M/、Ca2SO广）对盐析的影响比一价离了要强一些。因此，

7、饱和（毗）2SO,溶液的盐析效果最好,饱和NH4CbNaCT,MgSO-7H0溶液的盐析效果相近。所以，做蛋白质盐析实验吋，应尽量选择溶解度大的强电解质盐。2.3酸和盐的加入顺序对盐析的影响蛋白质的等电点对盐析冇影响。通过加酸调节蛋白质溶液pH,使pH处于鸡蛋清液屮含量最多的蛋白质一卵清蛋白的等电点范围内（4・5-4.9）,从而能降低蛋白质溶液的溶解性，达到盐析的效果。查阅文献得知，效果最好的酸是磷酸。但并未指出加酸、加饱和盐溶液的先后顺序。笔者对上述问题进行了多组对照实验。实验首先表明，加酸调节蛋口质溶液pll以增强其盐析现象，效

8、果是明显的;同时所用的酸中，效果最好、用量最少的为1mol/L磷酸，这与文献相符合；若选用硫酸、盐酸这样的强酸，最适宜的浓度为0.5mol/L硫酸和1mol/L盐酸，如强酸中C（H+1为2mol/L,则盐析后加水复原不完全,即发生了部