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1、谷物和豆类中粗蛋白质测定方法探析【摘要】国家标准GB/T5511—2008规定，谷物和豆类屮粗蛋白质含量测定方法为凯氏定氮法。该方法适用范围广泛，测定结果准确，重现性好，但因其称样量大，消化时间长，蒸憾前需要定容稀释，操作复杂费时，试剂消耗大，给测定带來一定麻烦甚至是误差。就如何缩短消化时间,方便、快捷、准确地获得最佳测定结果，本人在称样量、所加试剂的浓度以及吸收液的酸碱度方面进行了大胆的尝试与探析。【关键词】谷物和豆类中粗蛋白质；测定方法1.方法原理蛋白质是含氮的有机化合物，样品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合牛成硫酸鞍。然后碱化蒸憾使氨游离，用硼
2、酸吸收后，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定，根据酸的消耗量乘以蛋白质换算系数，即为蛋白质含量。2.试剂与仪器2.1浓硫酸混合液在100ml水屮缓慢加入浓硫酸200ml,冷却后加入30%过氧化氢300ml,混合均匀。2.2混合催化剂硫酸铜10g,硫酸钾100g,硒粉0.2g,在研钵中研细过孔径0.45mm（40H筛），混匀备用。2.3混合指示剂2份甲基红乙醇溶液（称取0.lg甲基红置于研钵中加入少许95%乙醇,研磨溶解后，加入75nil95%乙醇）与1份次甲基蓝乙醇溶液（0.lg次甲基蓝溶于80ml95%乙醇中）临用时混合。2.420g/l硼酸溶液称取20g硼酸溶于1000ml水中。2.5饱和
3、氢氧化钠溶液2.60.01mol/l盐酸标准溶液2.7仪器凯氏定氮蒸憾装置。3.操作步骤3.1消化称取0.050g左右（全部通过40目筛的）固体试样，移入50ml或100ml定氮瓶中，加入lg混合催化剂，再加入3ml浓硫酸混合液，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，以45度角斜支于有石棉网的电炉上。小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止，烟雾变白后，加强火力，保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热lOmin,取下放冷备用。同时做试剂空白试验。3・2蒸憾连接好定氮蒸憾装置，于水蒸气发生瓶内装水至2/3处，加数粒玻璃珠，加甲基红次甲基蓝指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加热煮
4、沸水蒸气发生瓶内的水至沸腾，反应室清洗干净示，即放缓加热至反应室内的残液不倒吸为宜，向接收瓶内加入10ml硼酸溶液及1-2滴混合指示液，并使冷凝管下端插入吸收瓶液面下，将定氮瓶中消化液用蒸馆水少量多次冲冼，使之全部干净地转移至反应室中，清洗进样口管路，塞紧棒状玻塞，加水封严。加热，待反应室内有热气进入，立即打开碱液管活塞加入饱和氢氧化钠至溶液呈现深褐色，停止加入，拧紧活塞，开始蒸憾。待吸收瓶中溶液出现绿色记时5min,到时后将接收瓶放低，继续蒸憾lmin,用蒸馆水冲洗冷凝管下部。2.3滴定取下接收瓶，以硫酸或盐酸标准滴定液滴定至淡紫色(灰红色)为终点，同时做试剂空白试验。2.4计算试样
5、中蛋白质含量按下式计算:X=(V1-V0)XCXO.0140XFX100/mX(1-M)式中：X——试样中蛋白质含量，单位为g/100g或g/100ml；VI、V0——试样、空白液消耗标准滴定液的体积，单位为ml；C——硫酸或盐酸标准滴定液浓度，单位为mol/L；0.0140——1.0ml硫酸或盐酸标准滴定液相当的氮的质量，单位为克；m——试样质量或体积，单位为克或毫升；F——氮换算为蛋白质的系数；M——试样水分％2.试验方法探析（1）称取的试样量由标准中规定的0.2-0.3g改为0.050g左右，可将消化时间由原来的2-3h缩短为40min,由于样品量减少还可免去消化液稀释左容带来的
6、麻烦与误差。不同称样量测试结果比对不同称样量空白加标回收率测试比对上述测试结果表明，对粗蛋口质含量较高的样品减小称样量,无论对结果的准确性还是重现性都无任何影响。这样既节省时间，提高工作效率,又降低了实验成本，降低了对环境的污染。（2）氢氧化钠由400g/l改为饱和溶液。因为在蒸憾过程中，消化液中的硫酸鞍若没有足够的碱来中和，很难使氨彻底分离出来，甚至导致整个测定失败。氢氧化钠在本方法中的作用有两个方面，一是中和样品消化液中剩余的酸，二是为氨的有效分离提供一个碱性环境。所以我们在尽量不增加反应室内液体体积的前提下，采取加入饱和氢氧化钠來保证氨的冇效分离，彻底放出，得到可靠、准确的测定结
7、果。（下转第184页）（上接第75页）（3）将20g/l的硼酸吸收液PH值调整为5.4左右。因甲基红和次甲基蓝混合指示剂的PII变色范围为5.4,只有当酸碱反应的等当点，落在指示剂PH值变色点范
8、韦
9、内，所得的测定结果才愈准确，多次实践证明也只冇当硼酸的PH值在5.4左右时，空白值才能出现正常，既消耗标液体积在0.2-0.4ml,同时空白加标回收率才能达到理想的效果,否则，将出现空白值为零，空白加标回收率偏高或偏低现象，测定结果准确性差。2.注
