大肠菌群测定培养基适用性检查

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1、大肠菌群检测培养基适用性检查1、验证目的：大肠菌群检测的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的n的是确认本公司采购的双料乳糖蛋白丿冻培养基、单料乳糖蛋白丿冻培养棊、三倍浓缩乳糖蛋白丿冻培养基、双料乳糊胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、EHB培养基、EC培养基和EC-MUG培养基适合大肠菌样的检测。2、验证项目：双料乳糖蛋白豚培养基、单料乳糖蛋白陈培养基、三倍浓缩乳糖蛋白豚培养基、双料乳糖胆盐发酵培养棊、乳糖发酵培养棊、EMB培养基、EC培养棊和ECMCG培养基的适用性检查。3、参与人员：余踹、王慈媛、周海江4、仪器与试剂：4

2、.1培养基：双料乳糖蛋白腺培养基、单料乳糖蛋白腺培养基、三倍浓缩乳糖蛋白豚培养基、双料乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基、EMB培养基、EC培养基和EC-MUG培养基、TSB肉汤培养基、TSA培养基干粉培养基按生产厂家说叨卩耍求制备，实验室口制培养基制备记录见表一。4.2仪器设备：立式高压蒸汽火菌器、干热消毒箱、净化工作台、电热恒温培养箱、微波炉4.3验证用菌株：人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌5、验证过程5.1菌液制备：接种人肠埃希菌、金黄色匍萄球菌的标准储备菌株至TSB肉汤培养基中，36±rC培养18〜24小时,,用0.85%的

3、无菌氯化钠溶液10倍梯度稀释,制成含菌10-100CFU/ml的菌悬液。5.2生长率实验：4.2.1接种5O

4、J1大肠埃希菌的菌悬液于双料乳糖蛋白丿冻培养基、单料乳糖蛋H腺培养基、三倍浓缩乳糖蛋白豚培养基、双料乳糖胆盐发酵培养基、乳糖发酵培养基，置于36±rc培养24±2小时，每种培养基平行制备2只试管，同时制备空白对照。培养后观察产酸产气现彖。5.2.2接种hnl大肠埃希菌的菌悬液于EC培养基中，置于36±1°C培养24±2小时,平行制备2只试管，同时制备空口对照。培养后观察目标菌的浊度值，并观察产气现象。5.2.2接种lm

5、l人肠埃希菌的菌悬液于EC-MUG培养基中，置于36±1°C培养24±2小时，平行制备2只试管，同时制备空白对照。培养24小时后，置于366nm紫外灯下观察荧光现象。5.2.3取lml大肠埃希菌的菌悬液于灭菌平1EL'

6、«,注入不超过45°C的EMB和TSA培养基，置于36±PC培养24±2小时，每种培养基平行制备两个平皿。5.3选择性实验：取金黄色葡萄球菌的菌悬液1,取一满环川半定量划线法划线接种于的EMB平板，置于36±1°C培养24±2小时，平行制备两个平皿。培养后计算生长指数G。6、结果见附表附表一:实验室自制培养基配

7、制记录双料乳糖胆盐培养基配置量：pH值:成分蛋白月东胆盐乳糖0.04%漠甲酚紫水溶液蒸憾水含量乳糖发酵培养基配置量:pH值:成分蛋白腺乳糖0.04%澳卬酚紫水溶液蒸憎水含量复核人:日期：配制人:FI期：附表二大肠菌群检测培养基适用性检查记录检查所用培养基信息培养基名称生产厂家批号规格实验口期报告日期检验依据:GB4789.28-2013实验结果培养基名称12空白双料乳糖蛋口月东单料乳糖蛋白月东三倍浓缩乳糖蛋白腺双料乳糊胆盐发酵管乳糖发酵培养基EC培养基EC-MUG培养基标准规定试验菌在被检培养基上应生长良好，并冇特征性反应。生

8、长率实验EMB培养基TSA培养基回收率菌落计数菌落形态特征标准规定被检培养棊上的菌落平均数应不小于TSA培养棊上的菌落平均数的50%,选择性实验EMB培养基菌落形态描述生长指数标准规定G<5o实验人：复核人:LI期:口期：实验室结论:评价人/日期: