提取法用于伊曲康唑胶囊微生物限度方法检查

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1、提取法用于伊曲康哇胶囊微生物限度方法检查提取法用丁伊曲康卩坐胶囊微生物限度方法检查【摘耍】目的：探讨伊曲康醴胶囊微生物限度方法学验证。方法：采用十四烷酸异丙脂提取法，将有抑菌成分的物质转移至油相,水相用于试验。结果：白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率达到70%以±o结论：提取法叮以用于伊曲康】坐胶囊微生物限度方法检查，简单易行。【关键词】提取法；伊曲康I坐胶囊文章编号：1009-5519(2007)03-0343-02中图分类号：R9文献标识码：A伊曲康哇胶囊是抗真菌的药物，在水中不溶，其内容物为包衣颗粒，进行微生物限度方法学验证时发现真菌的回收率不到70%,选用离心薄膜过滤

2、法无法滤过，我们利用油水相分层原理选用适宜的提取液提取供试品的稀释液，将水相用于试验。1仪器与材料1.1玻璃器1111：培养皿，量筒，输液瓶(100ml,250ml),一次性注射器。1・2试剂：十四烷酸异丙脂(国产和进口)。培养基：营养肉汤、营养琼脂培养皋、玫瑰红钠琼脂培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液。对照菌：枯草杆菌CMCC(B)63501第三代；金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003第三代；大肠埃希菌CMCC(B)44102第三代；白色念珠菌CMCC(F)98001第三代；黑曲霉菌CMCC(F)98003第三代。供试品：伊曲康卩坐胶囊(批号2006010

3、6生产厂家；成都倍特药业有限公司)。2试验方法2.1常规法2.1.1菌液制备：（1）取经35°C培养24小时，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物1ml加9ml无菌生理盐水，10倍稀释至10-5〜10-7,细菌数约为50〜100cfu/ml,做活菌计数备用。（2）取经25°C培养24小时的口色念珠菌霉菌液体培养物1ml加9ml无菌生理盐水，10倍稀释至10-5-10-7,细菌数约为50〜100cfu/ml,做活菌计数备用。（3）取经25°C培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加5ml盐水洗下霉菌抱子，吸取出菌液，然后取1ml加9ml无菌生理盐水，逐管10倍稀释为1

4、0-4,细菌数约为50-100cfu/ml,做活菌计数备用。2.1.2供试液的制备：取伊曲康醴10g,加pll值为7.0的无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液200ml,45°C保温，使胶囊溶解，使分散均匀，制得1：20供试液，分别人工污染上述5种代表试验菌株。再加15〜20ml琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24〜72小时观察结果细菌与霉菌计数，测定回收率。2.1.3该供试品对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的回收率试验均高于70%,可采用常规方法检验。对口色念珠菌、黑曲霉菌有很强的抗菌活性，供试品回收率为0%,均低于70%。2.2釆用

5、•四烷酸异丙脂提取将有抑菌成分的

6、物质转移至油相、水和用于试验。2.2.1提取液的筛选试验：取木品10g,加45°CpH7.0无菌氯化钠-蛋口月东缓冲液200ml,使分散均匀，取该1：20供试液上清液10ml置于100ml输液瓶中，分别加无菌十四烷酸界内脂20ml、30ml、40ml、50ml,充分振摇，将输液瓶倒置，静置使油水明显分层，分别取其水层1ml加入平皿，分别人工污染白色念珠菌、黑曲霉菌2种试验菌株，再加15-20ml琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养72小吋观察结果细菌与霉菌计数，测定刨收率。结果见表1。2.2.2稀释液回收率试验：十四烷酸异丙脂50ml中加入稀释液（pH7.0无菌氯化钠-

7、蛋口月东缓冲液）10ml共5瓶，分别人工污染枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、口色念珠菌、黑曲霉菌5种试验菌株，振摇5分钟，倒置分层，分别取其水层1ml加入平皿。再加15〜20ml琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养48〜72小时观察结果细菌与霉菌计数，测定回收率。结果见表2。另取十四烷酸异内脂油层平皿计数，均无菌生长。表1结果证明,采用提取法加入提取液50ml时可消除供试品对人T污染白色念珠菌和黑曲霉菌的抑菌作用，回收率达到70%以上。表2结果说明，细菌和真菌基本上存在水和，稀释液回收率80%以上。因此，提取法可用于伊曲康呼胶囊的霉菌检查。3讨论3.1供试品为胶囊

8、剂，需45°C水浴保温使囊壳溶解；其内容物为包衣颗粒，需用匀浆仪或研细方法让供试品分散均匀；1:10的浓度比较黏稠，虽然伊曲康呼对细菌没有抑菌作用，也将细菌和大肠埃希菌检查都釆用1：20。3.2霉菌检查时不能将十四烷酸杲内脂直接加入供试品中；十四烷酸异丙脂用量太大，成本太高。吸取上清液10ml时应注意不要吸入颗粒，否则会堵塞注射器针头；分层后用注射器缓慢吸取下层水相,注意不要吸取到十四烷酸界内脂层。3.3伊曲康醴在十四烷酸异丙脂中有紫外吸收，我们用紫外检查的方法对提取液油相进行测定，以检查提取液是否提取完全，20ml,30ml,40ml,