中华鳖雄激素受体基因的克隆及生物信息学分析【开题报告】

《中华鳖雄激素受体基因的克隆及生物信息学分析【开题报告】》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、毕业论文开题报告生物工程中华鳖雄激素受体基因的克隆及生物信息学分析1.课题研究意义及国内外研究现状中华鳖(Pelodiscussinensis)是我国重要的特种经济动物，其隶属于龟鳖目(Testudinata)、鳖科(Triony—chidae)、鳖属(Pelodiscus)．中华鳖由于其独特的食用价值和药用价值得到广大养殖户的青睐，研究雄激素受体（AR）在不同发育期精巢中的免疫组织化学定位、AR基因克隆与表达等内容，在理论上丰富中华鳖生理学资料，在实践上为中华鳖的生殖调控和育种提供重要参考，为研究爬行动物性激素水平与免疫功能的关系提供形态学依据。

2、爬行动物属于变温动物，免疫系统受季节变化影响明显，季节变化将导致其淋巴器官结构以及白细胞功能的改变。Leceta等推测循环系统内周期性变化的类固醇激素水平可能是导致淋巴器官发生季节性变化的主要原因[1]。雄激素属于类固醇激素，其生物学作用是通过特异的雄激素受体(AndrogenReceptor，AR)介导的[2]。因此，了解ARmRNA在免疫器官内的分布，对探讨雄激素水平变化影响免疫器官结构及功能变化有着十分重要的意义。目前已有研究证明，在大鼠、小鼠及人淋巴组织中存在着雄激素受体，其中研究最多的是在胸腺淋巴组织中。Lu等和Blazquez等均利用R

3、T-PCR技术分别在犬和鲈鱼(Dicentrarchuslabrax)的脾脏内检测到了ARmRNA的存在。Bruce等检测到正常小鼠脾脏中CD4+T细胞及Mac-1+巨噬细胞ARmRNA的表达[1]。但迄今为止，未见到有关爬行动物免疫系统雄激素受体的报道。AR广泛分布在睾丸、卵巢、前列腺、输精管、生殖器、毛囊、汗腺、肝脏、肾上腺皮质、胸腺、甲状腺滤泡细胞、松果体、心肌、骨骼肌、平滑肌、人外周血白细胞、血小板、巨核细胞、骨髓细胞等各种组织中,在不同组织中表达水平不同,即使同一组织,处于不同发育阶段或在病理状态下AR表达水平也不一致。AR是雄激素作用的

4、中介物质,雄激素通过与AR结合而发挥其功能,若无雄激素受体则雄激素对组织无刺激反应[3]。在表达方面，牛蛙的AR在脑、精巢、肝脏、小肠、肾脏、心脏和指垫中均有表达(Chattopadhyay等，2003)。人、小鼠和大鼠的AR的表达模式结果显示，脾脏中没有AR的表达，雌雄性生殖器官、肝脏、心脏、肾上腺、骨骼肌、肾脏、平滑肌、垂体前叶、前列腺、脑组织中均有AR的表达，其中雌雄性生殖器官的表达量最高。在人体中，睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)均是AR的有效配基（Kang，2003）。雄激素在细胞内与AR结合后形成雄激素受体复合物，可进入核内，通过一系列受

5、体后机制将细胞外的雄激素信号传导到DNA上，调控特殊的基因表达，产生雄激素的生物效应（Cynthia，2002）。AR结合容量的高低就决定着体内有效雄激素水平的高低，是雄激素发挥同化作用的限制因素。鱼类具有两个由不同基因编码的雄激素受体，ARα和ARβ，而且在鱼类中两个AR的组织表达模式也有很大差别。在已知的存在两种AR亚型的鱼类中，ARα和ARβ两个亚型的表达模式、配体结合方面有很大的不同，如日本鳗鲡（Anguillajaponica）的ARα在脾、肾、心脏、肌肉、肝、精巢、卵巢和脑中有表达，但ARβ只在肌肉、脾脏、和精巢中有表达。秦立红,刘伟英

6、等[4]采用实时荧光定量RT2PCR技术检测AR基因在草原红牛公牛和母牛多种组织中的表达情况,探讨该基因在草原红牛公牛和母牛不同组织中的表达规律,为深入研究AR基因的生物学功能及作用机制奠定了基础。李梅英，张莉等[1]采用原位杂交技术对中华鳖脾脏免疫细胞内ARmRNA的分布进行了研究，结果显示，ARmRNA存在于中华鳖脾脏免疫细胞内，从基因水平上证实了中华鳖脾脏免疫细胞内AR的存在，即免疫细胞上存在雄激素结合位点，从而为雄激对免疫系统有调节作用提供了理论基础和形态学依据。而刘晓柳[5]等采用原位杂交的方法观察到成年雄性大鼠心肌中ARmRNA存在于胞

7、浆中，同时也证实了大鼠心内神经节ARmRNA也存在细胞浆中。但张宝刚等[6]发现人脾脏免疫细胞中除胞浆外细胞核内也存在β-肾上腺素能受体的mRNA。2.课题研究的主要内容、预期目标和研究方案在人体内，雄激素主要是指睾丸Leydig细胞合成、分泌的睾酮(Testosterone，T)及其在靶细胞内的活性代谢产物—双氢睾酮(Dihydrotestosterone，DHT)(Baker，1997）。在脊椎动物中，雄激素参与广泛的生理学过程，如在人体中，雄激素的主要作用是在人胚胎期诱导男性内外生殖器的分化、青春期促进男性第二性征的出现及性成熟后维持男性性功

8、能和生育能力（Baker，1997）。而要实现这些功能，需要有雄激素受体（androgenreceptor,AR）的介导。