一、网织红细胞（Ret）计数

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1、网织红细胞（Ret）计数RBC生成过程：多能干细胞原红早幼红中幼红晚幼红成熟RBCRet概念:是介于晚幼红和成熟红细胞之间尚没有完全成熟的红细胞，因其胞浆中尚有残存的嗜碱性物质（RNA、核糖体）经活体染色后，聚集成深染颗粒，颗粒多时形成网状，故名网织红细胞。正常情况下，晚幼红脱核后平均需2天才能发育成完全成熟的RBC。RETRET分型较成熟RBC稍大，直径8.0～9.5µm。0ⅠⅡⅢⅣ骨髓，外周难见周围血少量外周最多(0.08%)(0.15%)（60%以上）花冠型丝球型网型、破网型点粒型有核充满，相互连接松散，连成网稀疏，丝点状散在，细颗粒细丝状ICSH及NCCLS的定义：网织红细胞

2、是已不含有细胞核的红细胞，故认为应分四型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。RET【器材和试剂】1.显微镜、Miller窥盘。2.新亚甲蓝染液（WHO推荐）新亚甲蓝N0.5g草酸钾1.6g蒸馏水100ml，用前过滤。WHO推荐，其对Ret染色力强且稳定，但该染液在室温下只稳定3周；3.灿烂甲酚蓝染液：灿烂甲酚蓝1g柠檬酸三钠0.4g氯化钠0.85双蒸水100ml，用前过滤。费用低廉，国内目前使用的主要方法；但易产生沉淀。AB13四、操作1.取小试管一支，加染液和血液各2滴，混匀。2.置37℃水浴箱15min，取出后微振2min，推片。3.将Miller窥盘放入目镜，选择合适部位计数，油镜下Miller

3、窥盘的小格A内计数所有无核红细胞，大格B（含小格面积）内计数网织红细胞。或计数1000个红细胞中的网织红细胞数。五、计算1.Ret%=×1002.绝对值计算:RBC×Ret%（×109/L）大格网织红细胞总数小格红细胞总数×9AB13控制Ret计数CV=10%(ICSH推荐)需镜检的RBC数Ret（%）窥盘小方格内镜检RBC数相当镜检RBC总数１～２10009000３～５5004500６～10200180011～25100900【正常参考值】方法年龄组相对值（%）显微镜成人、儿童0.5～1.5计数新生儿2.0～6.0【测定方法及评价】1.显微镜计数法：国内的主要方法，器材价廉、作简单

4、、费用低。缺点：工作效率低、精密度低，操作批内重复CV在20%以上；其相对计数结果（%）显著受成熟RBC浓度的影响，使用Miller窥盘可将计数精密度控制在CV≤15%，可提高工作效率。2.网织红细胞仪测定法：采用流氏细胞技术，将RBC经特殊荧光染料染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国内逐步推广使用。但成本高。近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。【质量控制】1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4ºC，可延长至8h.2.染色温度控制在37ºC为宜，无论何种染液，室温（25ºC）以

5、下染色时，RET检出率明显减低，故要求37ºC恒温染色。3.玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉淀的干扰，故已少用。4.试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。5.推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。6.ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±【临床意义】（1）评价骨髓造血功能：①RET↑是红系造血功能活跃的反映。表示骨髓造血功能旺盛，见于增生性贫血，以溶贫最为显著（6～8%，急性溶血可达20%，严重者可达40～50%）；急性失血可明显↑；缺铁和巨贫RET正常或轻度↑。②RET↓

6、表示骨髓造血功能减低，多见于再障，尤以急性再障最为显著，典型病例RET常低于0.5%，甚至为0，RET绝对值低于15×109/L常作为再障的诊断标准之一。也可见于急性白血病时骨髓红系增生受抑制或因化疗、放疗造成的骨髓抑制。【临床意义】（2）贫血治疗的疗效观察：①巨贫、缺铁经合理治疗后，RET逐渐↑，并先于RBC、Hb的↑。用药后3～5d开始↑，7～10d达高峰(一般为6～8%，高者达10%)，治疗2周左右逐渐下降，然后RBC、Hb才逐渐↑。②再障治疗有效时，RET逐渐回升甚至轻微升高。【临床意义】（3）作为观察病情的指标：①溶血和失血性贫血在治疗过程中，连续进行RET计数，可作为判断

7、病情变化的参考指标。如治疗后RET逐渐降低，表示溶血或出血已得到控制；如RET持续不减低，甚至更见增高，表示病情未能控制，甚至还在加重。②RET计数对骨髓移植后造血功能重建情况及造血功能状态估计有一定价值。如Ret>15×109/L,表示无移植并发症；若Ret<15×109/L，说明可能失败。血红蛋白测定血红蛋白组成珠蛋白肽链（4条）,每条折叠的珠蛋白肽链结合1个亚铁血红素，分子量64458（不带O2）。血红蛋白珠蛋白肽链亚铁血红素珠蛋白肽链亚铁血红素珠蛋