医学微生物实验指导

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1、医学微生物学实验指导潍坊医学院病原生物学教研室二00六年九月医学微生物学实验指导主编：岳启安副主编：吴晓燕赵淑梅金光香马麦生编者：（按编写先后顺序）岳启安吴晓燕王红艳赵淑梅金光香马麦生宫英实验须知一、实验的目的及要求1•验证和巩固课堂上所学的理论知识。2.实验前做好预习，明确实验目的和内容。3.学习和掌握微生物学的基本操作技术，为学习临床课程与防治疾病打下基础。4.培养严谨求实的科学态度，独立分析问题和解决问题的能力。5.微牛物学的实验对象为肉眼看不见的病原微生物，因此，必须进行严格无菌操作，以免造成人为

2、传染。二、实验室规则1.进入实验室要穿工作服，非必要的衣物书籍请勿带入。2.实验室保持安静，禁止饮食、吸烟和随地吐痰，保持清洁卫生。3•用过的带菌材料、器材（吸管、试管、玻片等）应放在指定的消毒缸内，如遇材料破损或物品被污染，应立即报告老师进行处理。4.注意安全，实验用酒精灯不可互相对点，火焰不可靠近易燃物如酒精、二甲苯等。5.爱护国家财产，节约实验用品，损坏器材应主动报告登记。6.实验完毕，应清洁桌面，进行湿性打扫室内卫生，用消毒水或肥皂洗手，检查水、电源，门窗关好后方可离开。实验一细菌的形态学一、油镜

3、的原理和使用方法1二、细菌的基本形态和结构1三、革兰染色法2实验二细菌的生理4一、细菌培养基的制备4二、细菌培养法与生长现象观察5三、细菌在自然界及正常人体的分布8四、细菌的生化鉴定9实验三外界因素对细菌的影响13一、消毒与灭菌13二、噬菌体15实验四细菌的遗传变异17一、细菌的鞭毛变异17二、细菌的耐药性变异17三、细菌的L型变异17四、R质粒接合传递试验18实验五细菌的致病性19一、透明质酸酶试验19二、荚膜的致病作用19三、细菌外毒素的毒性作用19四、细菌内毒素的致热作用20实验六机体的天然抵抗力2

4、1一、吞噬细胞的吞噬作用21溶菌酶试验21实验七细菌质粒DNA的提取23实验八化脓性球菌25球菌的菌落观察凝固酶试验….…一、球菌的形态观察252525四、细菌的触酶试验26五、细菌耐热核酸酶试验26六、抗链球菌溶血素0试验（简称抗0试验）26七、胆汁（胆盐）溶菌试验27八、脓汁中病原球菌的检查程序27实验九肠道杆菌30一、常用肠道杆菌鉴别培养基及主要生化反应培养基30二、肥达试验与外斐反应31三、病原性肠道杆菌的分离与鉴定方法33实验十弧菌35一、霍乱弧菌的形态观察35二、霍乱弧菌的分离程序35三、霍乱

5、弧菌的快速诊断35实验十一厌氧芽胞梭菌37一、厌氧培养法37二、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌的形态及培养特性37三、产气荚膜梭菌在牛乳培养基中的“汹涌发酵”现象37实验十二棒状杆菌39一、白喉棒状杆菌的形态与染色39二、白喉棒状杆菌的培养特性39三、白喉棒状杆菌的毒力试验39实验十三分枝杆菌41一、结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌形态观察41二、结核分枝杆菌的培养特性观察41三、结核病人痰标本的检查41四、结核分枝杆菌毒力试验42实验十四支原体44一、支原体形态观察44二、支原体在培养基上生长的菌落观察4

6、4实验十五立克次体45一、立克次体形态观察45二、立克次体染色方法45三、血清学诊断：外斐反应45实验十六衣原体47一、衣原体包涵体的形态观察4748实验十七螺旋体48一、螺旋体的形态观察钩端螺旋体的活体标本检查一暗视野显微镜检查法48三、钩端螺旋体的显微镜凝集试验一凝集溶解试验48四、口腔螺旋体检查49实验十八真菌50一、真菌的基本形态与菌落观察50二、浅部真菌的临床标本检查50三、深部真菌的临床标本检查51四、真菌的培养5153五、真菌毒素的检测51实验十九病毒的形态及分离培养技术一、病毒电镜照片观察

7、53二、病毒包涵体观察53三、病毒动物接种法53四、病毒鸡胚接种法54五、病毒的组织培养法55实验二十病毒的血清学试验57一、病毒血凝效价滴定57二、病毒血凝抑制试验58三、病毒中和试验58实验一细菌的形态学内容1.油镜的原理和使用方法2.细菌的基木形态和结构3.革兰染色法一、油镜的原理和使用方法1.显微镜油镜的原理：细菌体积微小，放大1000倍以上才能看清楚。由于油镜镜片直径小，又因介质（从载玻片至空气再进入汕镜）密度不同，有些光线因折射就不能进入透镜（图la）,致使射入的光线较少，物象显现不淸。若在透

8、镜与载玻片中间加上和玻片折光率（n=1.52）411仿的香柏油（n二1.512）则不使透过的光线有所损失（图lb）,进入透镜的光线量多，视野的高度也就增大了，故物象清楚。图1油镜的光线透过原理2.油镜的使用方法：（1）尽蜃升高聚光器，放人光圈，调节反光镜，使射入镜筒的光线最强。（2）标木片的待检部位滴加镜油一•滴，将标本片放在载物台上固定，将待检部位移置于物镜下。先用低倍镜找到适宜的视野，然后再换汕镜检查。（3）从侧面注视油镜