辣椒红素的提取、分离及鉴定

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1、辣椒红色素的提取、分离及鉴定一、实验目的1.了解从红辣椒中提取辣椒红索的原理和方法；2.进一步熟悉回流、抽滤、薄层层析、柱层析等基木操作；3.学习红外光谱鉴定有机化合物的方法。二、实验原理红辣椒中含有辣椒红素、辣椒玉红素和仏胡萝卜素等儿种色泽鲜艳的色素，其中以辣椒红素为主。这几种物质都是有8个界戊二烯单元组成的四话类化合物，难溶于水和乙醇,易溶于石汕艇、氯仿和二氯甲烷。其屮极性较人的红色组分主要是辣椒红素和辣椒土红素,占总量的50%-60%；另一类是极性较小的黄色组分，主要成分是卩■胡萝卜素和玉米黄质。辣椒红素不仅色泽鲜艳、热稳定性好、而且耐光、耐

2、热、耐酸碱、耐氧化、无毒副作用,是高品质的天然色素，可川作食品的添加剂，也广泛用于化妆品、保健药品等行业，其结构式如门在实验室中，常用二氯「卩烷（沸点39.75°C）作溶剂从红辣椒中提取辣椒红索。用二氯甲烷提取的混合物可通过薄层层析和柱层析将它们分离。在薄层层析中，有三个斑点，Rf值约为0.6的较大红色斑点为辣椒红素，Rf值稍大的较小红色斑点为辣椒玉红素，心值最大的黄色斑点是B■胡萝卜素。柱层析时，以硅胶为吸附剂，以二氯甲烷为洗脱剂，町对比标准样品图谱较容易地将3种物质分开。红辣椒色索的薄层层析图最后，用紫外光谱测样品的九和并用红外光谱仪做辣椒红索

3、的红外光谱图，并将它与标准谱图比较，便可证明所得到的主要物质是否为辣椒红素。nnx辣椒红素的紫外可见吸收光谱图30002000wavenumbEcm]600%Transmlttance辣椒红索的标准红外光谱图三、实验仪器及试剂材料：干红辣椒（或辣椒粉）仪器：研钵、25ml锥形瓶3个、50ml量筒、50ml烧杯2个、50mL圆底烧瓶、沸石、电热套、球形冷凝管、布氏漏斗、抽滤瓶、蒸馆装置、滤纸、玻璃板、毛细管、层析缸、层析柱红外光谱仪等。试剂：二氯甲烷、硅胶G、硅胶（60〜200目）、0」mol/L乙酸钠、无水硫酸钠等。四、实验步骤1•实验材料前处理称

4、取5.00g-h红辣椒，去蒂、去籽后研磨成粉末。2•色素提取在50mL圆底烧瓶小加入3.00g磨细的红辣椒粉和25mL二氯甲烷（沸点39.75C）,力口沸石回流30min,冷却至室温。抽滤，得到红色滤液。3•薄层分离（1）制板。収4块玻璃板,洗净后用蒸侧水淋洗，再用少量乙醇淋洗，晾干；1R3.5g硅胶G,量取O.lmol/L的乙酸钠溶液10mL于研钵中，研磨至无明显颗粒几由稀变稠为止。将硅胶倒在玻璃板上，使快速流动，最终在板上均匀铺平且无气泡。风干，置于烘箱屮110°C活化30mino（2）点样。在薄层板一端据边缘约1.5cm处用铅笔轻轻画一条直线

5、作为点样线。収少量粗产品放入小试管中，加入10滴二氯卬烷溶解，用毛细管取此溶液在硅胶G板上点样，斑点直径不超过2mmo（3）展层。将薄层板放入盛有展层剂的层析缸屮进行展层。当展开剂达到该板的指定前沿时，取出层析板，用吹风机吹干或晾干，将该板与红辣椒色索的薄层色谱图比较，计算辣椒红素的Rf值。4•柱层分离（1）装柱。将层析柱洗净干燥，固定在铁架台上。取5g吸附剂硅胶（60〜200目）用适量洗脱剂二氯甲烷调成均匀糊状。关闭层析柱卜•方的活塞，先加入少量洗脱剂，再将硅胶缓慢而连续地装填到柱屮，同时将活塞打开在下而放一个干净的烧杯呈接洗脱剂。吸附剂全部装完

6、后在林小加入洗脱液将林内壁上残留的吸附剂淋洗卜來。此过程中应不断敲打色谱柱使色谱柱装填均匀没有气泡。继续流出洗脱剂，直至洗脱剂液面仅高于柱面2mm左右吋，关闭活塞。（2）上样。用长滴管加入已川二氯甲烷溶解好的粗色索，加完样后打开活塞，使液体样品进入，再用洗脱剂将粘附在层析柱内壁上的样品溶液洗下来。待这部分样品也进入示，再次加入洗脱剂进行淋洗。（3）洗脱。随着洗脱的进行，可以清晰地看到3个谱带，由下至上依次为卩■胡萝卜素、辣椒玉红素和辣椒红素。分别丿II3个25ml锥形瓶收集流出液，其中第三个锥形瓶内为辣椒红索。5•色素检验（1）最大吸收波长Xina

7、x：取上述辣椒红素溶液5滴于一试管中，加入5ml正已烷，并以正已烷为空H对其进行紫外扫描，找出九吋（正己烷对照下，辣椒红素Xmax=470nm）o（2）红外光谱图：取上述辣椒红素溶液少量，在红外光谱仪上做红外光谱图，并将谱图与标准红外光谱图作比较。五、注意事项1.回流时速度不宜过快，以防浸泡捉取不充分。2.回收溶剂时温度不宜过髙，以防止溶剂爆沸；另外，尽量将溶剂蒸干。3.不可用同一支毛细竹汲取不同的样液。