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1、CFTR表达的研究胆囊结右病人胆囊黏膜组织CFTRmRNA表达与胆囊结右形成关系的研究陈锦鹏王志伟*朱铭岩沈洪薰倪启超陈玉泉中文摘要冃的：研究胆囊结石患者胆囊黏膜组织CFTRmRNA的表达与胆囊结石形成的关系。方法:用RT-PCR方法测定胆囊黏膜黏膜CFTRmRNA表达。结果：胆囊结石组CFTRmRNA表达显著高于对照组(P二0.002)o结论：胆石症患者CFTRmRNA高表达与胆石的形成冇关。关键词：胆石症囊性穿膜传导调节因子RT-PCRTheexpress!onofCFTRmRNAofgallbladderwallin100patientswithgallstorw
2、sChenjinpcng,Zhumingyan,Wangzhiwei,DepartmentofGonoralsurgery,AffiliatedHospitalofNantongmedicalcollage,Nantong226001Objective:ToinvestigatetheexpressionofCFTRmRNAofgallbladderwallof100patientswithgallstones.Methods:weinvestigatedtheCFTRmRNAexpressionofgallbladderwal1of100patientswithgal
3、Istonesbyreversetranscriptpolymerasechainreaction(RT-PCR).Results:CFTRmRNAexpressionofgallbladderwal1of100patientswithgallstoneswashighersignificantlyinexperimentalgroupthanincontrolgroup(0.493±0.258vs0.382±0.105)•Conclusion:ThehighexpressionofCFTRmRNAofgal1bladderwal1wasassociationtogal
4、Istone.[keywords]cholecystitisCFTRRT-PCR囊性穿膜传导调节因子(cysticfibrosistransmembranceconductanceregulator,CFTR)是目前的研究热点之一。2000年10月-2002年3月,我们用RT-PCR分析研究100例胆張结石患者及50例正讯对照组胆囊黏膜CFTRmRNA表达，探讨胆囊结石症患者胆囊组织CFTRmRXA的表达与胆石成因有关系。材料与方法一、临床资料南通医学院附属医院普外科住院行胆囊切除术的胆囊结石患者100例为实验组，其中男47例,女53例，男女性别比为1：1-3,平均年龄
5、为50.35岁;对照组50例，为行上腹部手术的非胆囊结石病患者，其中男26例，女24例，男女性别比为1.08：1,平均年龄为61.1岁。二、标本收集胆囊标本采取，当术中取下胆囊时立即剪下0.5X1.0cm人小全层胆囊黏膜组织2〜3块,用无菌生理盐水冲洗三次后装入Eppendorf管，立即置入液氮屮，迅速送至实验室，置于-85°C深低温冰箱冷冻保存待测.三、试剂与仪器TRIZ0L试剂，为美国Technologies公司产品。逆转录试剂盒Access木课题为江苏省科委资助课题（BJ200053）通信联络人：王志伟南通医学院附属医院普外科226001RT-PCRSystem为
6、美国Promega公司生产。PCR仪GeneAmpPCRSystem2400为美国PERKINGELMER公司产品。四星凝胶图像分析系统为上海四星生物技术公司产品。实验用的刀、剪、银子、及玻璃制品均经200°C高温2h烘烤处理。Eppendorf管等塑料制品均fflDEPC水处理。CFTR及内参P-actin引物按有关文献［1,2］设计，由上海生工生物工程公司合成。目的基因的基因库登录号为XM_004980,全长6136bp,扩增片段全长267bp,内参B-actin扩增片段全长531bp。P-actinSense:5'-CCCTGGACTTCGAGCAAGAGAT-3
7、'Antisense:5,-GTTTTCTGCGCAAGTTAGG-3'CFTR：Sense:5,-ACTGGAGCAGGCAAGACTTCA-3'Antisense:5'-CAGTGTGATTCCACCTCTC-3,四、实验方法取新鲜组织约100〜120mg,提取总RNA。甲醛变性胶电泳检测其RNA完幣性。RT-PCR扩增采用ACCESSRT-PCRSYSTEM,第一链eDMA合成及PCR反应均在同一体系完成。取DEPC水处理过的100u1Eppendorf管,依次加入AMV/TFI5XBuffer10u1,dNTPmix1U1,25M
