复合配基层析介质CaptoMMC

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1、GEHealthcare产品文献11-0035-45AA复合配基层析介质CaptoMMCCapto™MMC是一种复合配基的阳离子交换层析介质。属于BioProcessTr/介质系列中Capto产品家族中的一员，适用于快速、高效且具有成本效益的蛋白质纯化工艺。CaptoMMC之所以能提高生产力，降低成本，在于以下性质：・在高电导率的条件下，有鬲动态载量。・大条件的处理量・新选择性・更小的单元操作耐高盐的高流速琼脂糖上层析介质CaptoMMC为新一代的层析基质以及和最新的配基化学创新成果。其吸附过程具有耐盐特性，表明

2、该配基可在高电导率下直接逬样并且蛋白结合在配基上。该介质结合在高强度的琼脂糖碱性基质上，因此在放大时具有流率快、低反压的特性。CaptoMMC的一些性质总结在表1中。复合配CaptoMMC具有一个复合配基（图1）,因此可通过不同的方式与靶分子逬行结合。此配基包含了一个竣基基团，因此在性质上与弱阳离。图1・CaptoMMC上的复合配基子交换层析介质有部分相似。然而，除离子交换吸附原理外，该介质与靶分子间还存在其他类型的相互作用，包括氢键和疏水作用。CaptoMMC可以在高流速下处理以及高电导率下逬行蛋白吸附。它增加

3、了大规模生物处理操作过程中的体积通屋和生产力O表l.CdDtoMMC的件质基质高度交联的琼脂糖功能基团总的离子容积颗粒大小*流率动态载量tPH稳定性¥短期长期工作温度§化学稳定性复合弱阳离子交换配基0.07-0.09mmolH+/ml介质75um(d50v)柱压＜3bar（0.3Mpa）,柱床高20cm,柱直径为1m0yf,处理缓冲液（粘度与水相同）的流速至i!）600cm/h在电导为30mS/cm时大于45mgBSA/ml介质2-142-12+4-+30°C所有常用的水性缓冲液，1M醋酸，1M氢氧化钠，8M尿素

4、，6M盐酸弧以及70%乙醇避免使用氧化剂，阳离子清洁剂*d50v足扌8骥计体积分布下平均颗粒尺寸t采用Tricorn^5/100柱，柱床©10cm,用50mM酯酸钠，PH4.75,以及250mMNaCI逬行洗脱，流率控制在300cm/h,泠留时间为2mm,10%穿透下测得的动态载量:短期PH：在功能无明显变化的前提下，用于在位淆洗（室温下累积90・300小时）或淆酒的介质所在対pH范围^长期PH：在功能无明显变化的前提下介质工作的PH苑围。§CaptoMMC可在冷室环境中使用，但对于荣些蛋R而言结合矍会有所下降1

5、在40OC.1MNQ0H中存储一周民离子结合能力和碳含量无明显变化OCapto™新选择性和高耐盐性复合功能提供了有别于传统离子交换层析介质的新选择性，使得蛋白可在高盐浓度下结合（图2）。该介质可用于澄清样品溶液的直接上样，省去了为减少初始物质电导而逬行的样品稀释步骤。新选择性（图引也可用于解决某些在高电导或低电导下特定的纯化问题。高耐盐性叵60・5060302010b•乳球蛋口BSA?040501CaptoMMC,30mS/cmSPSephboseFastFlow,ISmS/cm0123456789接垃3£间ES

6、]图2A）接触时间为lmin时，CaptoMMC在不同电导下对三种不同蛋白的动态载量。B）将BSA（牛血清R蛋白）的动态载星作为接触时间对应的一个功能指标。CaptoMMC以30mS/cm运行，而SPSepharoseFastFlow在15mS/cm下运行。SP配基不具有耐高盐性，并且在该电导下不能与BSA蛋白结合。虚线部分指由于大规模柱体下对应的介质具有一定的流速限制，因此这部分的接触时间在大规模逬行时不适用。新选择性IAI人2%n

7、OtOMMC2000・1000・6080洗锐体枳向1102040669kDM0kO232kD140kD66669kDUOkD232kDU0kDMWHA®(mAUI-2500-2000・1500-1000-500-I11—I020SH16080洗肮体职向1>图3・A）CaptoMMC和B）SPSepharoseFastFlow对人血浆蛋白的选择性的研究。样品桶释5倍后，电导率为6mS/cm,PH约为6。收集组分（用箭头逬行标注）和流穿液成分（FT）使用非变性PhastGel™gradient8-25%电泳胶以及考马

8、氏亮蓝染色逬行分析。此外，鬲分子量标准（HMW.GEHealthcare）以及未逬行分离的HD浆样品将应用于凝胶上。SPSepharoseFastFlow的洗脱图形显示一个单峰，而CoptoMMC则出现两个甚至三个洗脱峰。非变性凝胶电泳同样表明了两种介质在组分分离上的差别。层析柱：ricron5/100介质：A）CaptoMMC；B）SPSepharoseFastFlow