诊断试剂盒［可编辑］

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1、结核性胸腔积液特异性诊断试剂盒的研制一、项目可行性报告(一)立项的背景和意义。结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(mycobacteriumtuberculosis,MTB)引起的以呼吸道传播为主的慢性传染病，是当今世界由单一致病菌感染引起的死亡率最高的疾病，严重威胁着人类的健康。特别是近10年来山于人口剧增、耐药性的产生、人类免疫缺陷病毒感染流行、免疫抑制剂的使用等原因，结核病日益严重，全球结核病疫情骤然回升。据资料报道，当前全球1/3的人感染了结核杆菌，每年冇800万至1000万新发结核病患者，有300万

2、人死于结核病［Z】。我国的结核病流行情况十分严峻，结核病人数位居壯界第二位,约占全球结核病人的四分Z—,是全球22个结核病高负担国家Z—，每年由结核病带來的总接经济损失超过40亿。2000年在我国31个省、直辖市、自治区组织进行第四次全国结核病流行病学抽样调查，结果显示全国人口结核感染率为45%,高于WHO估计的1/3水平，估计全国结核菌感染者5.5亿。农村结核患病率高于城市，西部地区患病率高于东部地区。全国现有活动性肺结核病人451万，菌阳肺结核病人196万，每年死亡人数约13万，在传染病小居第一位，是其它各种传染病和寄生虫病死

3、亡人数总和的2倍，结核病的发病数和死亡数自2005年初以来居27种甲乙类传染病首位，结核病己经超过肝炎一跃成为我国危害最严重的传染病。因此在全国范I节I内采取有效遏制结核病的策略刻不容缓W(二)国内外研究现状和发展趋势。由于结核主要通过飞沫传播，因此结核病的早期诊断非常重要，利用简单、快速、准确的实验室检查尽早对结核病做出诊断对控制结核病疫情至关重要。然而目前，结核病的诊断现状不尽人意，体外分枝杆菌分离培养是诊断结核病的金标准，其缺点是：培养周期长(约6周)，假阳性率高〔刃。近年来应用于临床的Bactec分枝杆菌培养/鉴定/药做系

4、统可将阳性标木检出时间缩短至平均9天，鉴定、药敏试验时间平均为4天，然而Bactec仪器价格昂贵，需进口厂家的专利液体培养基，费用较高，且方法仍然建立在以细菌培养的基础Z上，不管是检测菌体还是检测代谢产物，都要通过分枝杆菌的B然生长以积累菌量方能检出，而分枝杆菌的半长相对缓慢，因而它们都难以突破“慢”的限制［⑼。结核病诊断的免疫学检测，冃前仍普遍基于感染免疫学的概念检测结核菌抗原及其特杲性抗体，国内外研究者采川脂阿拉伯廿銅聚糖(LAM)、脂多糖(LPS)、结核菌重组蛋白相对分了量38000等或其他纯化蛋白作为抗原，以胶体金标记，建

5、立简便、快速免疫学诊断方法，如分子最38000的金标渗滤试剂以及结核特界性抗原免疫卬迹检测技术。但是，由于结核菌在属间和种间存冇共同的抗原决定簇，加乙直与体液免疫的相关性冃前尚未得到充分的阐明，因而在综合提高实验的敏感性和特异性方面未能取得实质性的进展W结核病免疫学检测,目前最常用的是PPD试验，以机体对注射的PPD是否产住变态反应來判断机体曾否感染过结核菌而作为一项辅助诊断指标。但是，山于PPD中含有许多分支杆菌共同的抗原，如卡介苗接种者PPD试验町呈现阳性结果，PPD皮试阳性并不能鉴别是因为结核分枝杆菌复合群感染还是接触环境中

6、非结核分枝杆菌或卡介苗接种后造成的致敏。PPD皮试诊断的特异性羌,用该方法进行结核病流行病学调杏获得的结核分支杆菌感染率并不能真正反映人群屮结核分支杆菌感染的实际状况。重症肺结核病人则往往因为机体免疫力低下而呈现阴性结果等情形，都大大降低了其临床价值［叫另外，近年来发展起来的分子诊断技术如PCR、PCR-RFLP、real-timePCR以及基因芯片技术，大多数需耍数小时才町以得到结果,R这些技术需要昂贵的仪器，存在假阳性和假阴性的问题，对实验室硬件和检测人员素质要求较高，故非常不适用于现场的快速检验、早期排杳和诊断［4-15*1

7、61O时I'可分辨荧光分析法（timeresolvedfluoroimmunoassay,TRFIA）是近十年发展起來的-•种微量分析方法，是目询最灵敏的微量分析技术，灵敏度完全可与放射免疫分析技术相媲美，甚至超过放射免疫分析的水平。时间分辨荧光分析法实际上是在荧光免疫分析（fluorescentimmunoassay,F1A）的基础上发展起來的一种特姝的荧光分析。在通常的荧光分析中，由于测试样品中含有多种荧光成分，背景荧光（来白胶体颗粒和溶剂分子引起的散射光、血清蛋口质和其他化合物发出的非特异性荧光）强度大，干扰强，成为荧光分析

8、法人范围推广使用的瓶颈。吋间分辨荧光免疫分析法可以有效的解决这一难题。它的基木原理用辆系金属离了（如Eu*、Sm3Tb3Dy3+）作为示踪物标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，鋼系元素作为示踪剂冇以下特点：①荧光物质激发光谱曲