免疫胶体金技术及其在禽病诊断上的应用

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1、免疫胶体金技术及其在禽病诊断上的应用【摘要】：免疫胶体金技术是i种新型免疫标记技术，与免疫荧光技术、酶联免疫吸附技术和放射免疫测定法相比更具优越性。本文综述了胶体金技术的发展简史、基本原理、制备方法、标记技术及其在禽病诊断小的应用情况。并对其优缺点进行了评价，对免疫胶体金技术的前景进行了展望。【关键词】：免疫胶体金、标记蛋白、标记物、禽病诊断ImmunogoIdTechniqueandItsApplicationintheDiagnosisofAvianDiseases[Abstract]：Tmmunogoldtechniqueisanewt

2、ypeofimmunemarkers,andithasmoreadvantagescomparedwiththeimmunof1uoresceneetechniquo,enzyme-1inkedimmunosorbentassayandradioimmunoassayDetermination.Thispaperreviewsthedevelopmenthistoryoftheimmunogoldtechnique,thebasicprinciplesofthepreparationiimhod,themarkertechniquesandt

3、heirapplicationinlhediagnosisofaviandiseases,theiradvantagesanddisadvantagesoftheevaluationandtheprospectsimmunogoldtechnique.[Keywords]：immunogold;Markerprotein;markers;diagnosisofaviandiseases免疫胶体金技术是一种常见的标记技术，它是以胶体金为标记物,利用特异性抗原抗体反应,在光镜、电镜卜•对抗原或抗体物质进行定位、定性乃至定量研究的标记技术，是继三大

4、标记技术(荧光索、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。1857年，法拉第用还原法从氯金酸水溶液屮制备胶体金，并发现在其屮加入少量电解质后，可使胶体金由红色变为蓝色,最终凝集成无色一而加入明胶或其他人分子物质便可阻止这种变化。他的重人发现奠定了胶体金制备和应川的科学基础⑴。直至1971年Faulk等将胶体金引入免疫化学。此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法,在生物医学领域得到了日益广泛的应用丽。口Faulk与Taylor在1971年创立胶体金标记技术以來，Geoghegan应用免疫金技术检测B淋巴细胞表而抗原，建立了光镜水平

5、的免疫金技术。Danscher在此基础上改进并发展了用银显影液增强光镜金颗粒可见性的免疫金染色法(IGSS)l2]©Holgate也对此法进行了改进0Leuvcring于1980年最早报道了用胶体金检测人绒毛膜促性腺激素(hCG)的凝集试验，1985年起冇商品试剂盒供应，从此胶体金成为免疫学测定方法研究开发的新热点，新的方法和试剂盒层出不穷⑶。1.免疫胶体金技术的基本原理免疫胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物，应用于抗原抗体反应小的一种新型免疫标记技术。胶体金(Couoidalgold)是由氯金酸(HAuCl)水溶液在还原剂作用下，聚合成

6、特定人小的金颗粒，颗粒Z间因静电作用形成一种稳定的胶体状态，也称金溶胶(goldS01)o利用胶体金在碱性环境小带负电荷的性质，与蛋口质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固的结合，这种结合对所标记蛋白质的生物活性无明显影响X除蛋白质分子外，胶体金颗粒还可以少其他多种生物大分子物质(如毒素、抗牛素、激素、核酸、多肽缀合物等)结合。1.免疫胶体金的制备2.1胶体金的制备利用还原法可以方便地从氯金酸溶液中制备不同粒径(5-150nm)的胶体金颗粒。胶体金的粒径不同会呈现不同的颜色。常用的制备方法有口磷还原法、抗坏血酸还原法、柠檬酸三钠还原法、糅酸一

7、柠檬酸三钠还原法、乙醇超声波还原法和硼氮化钠还原法。其中最常用的制备方法为柠檬酸三钠还原法，将0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，快速搅拌的同时迅速加入1%的柠檬酸三钠水溶液，继续加热，溶液颜色由浅黄色逐渐变为浅监色、蓝色、蓝紫色、紫红色，最后变为澄清透明的红色。此法制备程序简单，胶体金的颗粒形状、大小较均一。2.2胶体金标记蛋白的制备胶体金标记蛋白的制备，实质上是蛋白质等生物人分了物质被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程在免疫组织化学中，将胶体金结合蛋口质的复合物称为金探针，用于免疫测定吋多简称为免疫胶体金(immunogold)。胶体金对蛋白质

8、的吸附主要取决于标记体系的pH值、电解质浓度、被标记蛋白质用量等因索。在接近于被标记蛋白质的等电点或略偏碱(pH^pI)时，胶体金颗粒的吸附力最强，制成的胶体金一蛋