纳米胶体金免疫标记技术在牛病检测中的研究和应用

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1、纳米胶体金免疫标记技术在牛病检测中的研究和应用1，211332王武军，白泉阳，郑腾，徐淑菲，孔繁德，黄一帆(1．福建出入境检验检疫局，福建省检验检疫技术研究重点实验室，福建福州350001;2．福建农林大学生命科学学院，福建福州350002;3．厦门出入境检验检疫局，福建厦门361012)摘要:作者综述了以胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法为代表的纳米胶体金免疫标记技术近年来在牛病检测方面的研究和应用进展，并分析和预测其应用前景，为该技术在牛病临床检测领域的进一步研究与应用提供参考。关键词:纳米胶体金;胶体金免疫渗滤法

2、;胶体金免疫层析法;牛病;检测中图分类号:S852．4文献标识码:A文章编号:1671-7236(2012)08-0087-04纳米胶体金免疫标记技术是以纳米胶体金(常荷基团形成牢固的静电结合。这种结合不影响蛋白简称为胶体金)作为示踪标志物应用于抗原抗体检质的生物特性。胶体金颗粒表面所带的较多电荷使测的一种新型免疫标记技术，由Faulk等于1971年其对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A将胶体金引入免疫化学建立的一种免疫学方法，蛋白(SPA)、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、Leuvering于1980年最

3、早报道了用胶体金检测人绒激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，形成毛膜促性腺激素(mCG)的凝集试验。随后，该技术胶体金蛋白。借助具有高电子密度特性的金颗粒作在医学卫生、农业科学、生物科学等各领域不断得到为标记物，当金颗粒在固相载体上抗原抗体反应处广泛深入地研究。因其具有简单、快速、无污染、结聚集达到一定密度时，可出现肉眼可见的粉红色斑果易于判断等优点，目前，该技术在医学临床检验、点。所以胶体金作为标记物，即可用于免疫电镜、普食品安全检验、动物疫情监测等领域的研究和推广通光镜下的抗原定位、定量和定性研究，也可在体外

4、应用迅速。在兽医领域，研究和应用最广泛的是胶免疫层析分析中用于定性或半定量快速检测抗原或体金免疫渗滤技术和胶体金免疫层析技术。这2种抗体。胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法均属技术在对畜禽业有重要影响的畜禽病毒病、细菌病、于胶体金固相免疫测定方法。寄生虫病等病原和/或抗体检测方面均有相关研究胶体金免疫渗滤法(colloidgoldimmunofiltration报道。作者以胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析assay，GIFA)，又称斑点免疫金渗滤法(dotimmuno-法为代表的纳米胶体金免疫标记技术目前在牛病检gol

5、dfiltrationassay，DIGFA)，是将斑点ELISA与免测中的研究和应用进展作一综述，并分析和预测其疫胶体金结合起来的一种技术。将蛋白质抗原直接应用前景，为该技术在牛病检测领域的进一步研究点样于硝酸纤维膜(NC膜)上，在NC膜下垫有吸水与应用提供参考。性强的垫料作为渗滤装置，抗原与特异性抗体反应1纳米胶体金技术的检测原理后，再滴加胶体金标记的第二抗体，结果在抗原抗体氯金酸(HAuCl4)在还原剂(如白磷、抗坏血酸、反应处发生金颗粒聚集，形成肉眼可见的红色斑点，枸橼酸钠、鞣酸等)作用下，可聚合成直径为纳米级

6、从而检测相应的抗原或抗体。由于有渗滤装置，反的金颗粒，形成带负电的疏水性溶胶，溶胶中的金颗粒呈圆形，边缘平滑，完整，界线易于确定。由于静应很快，在数分钟内即可显出颜色反应，从而对结果电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体进行判断。胶体金免疫层析法(colloidgoldimmuno-金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电chromatographicassay，GICA)，也称横向流动免疫层析技术(lateral-flowimmunochromatographicassay)，收稿日期:2012-05-16

7、是在固相载体上结合免疫和层析技术的一种快速的作者简介:王武军(1974－)，男，山东人，兽医师，博士生，主要免疫学检测技术，主要是将胶体金标记的特异性已从事动物疫病检测技术研究。知抗原或抗体以条带或线状包被在特定载体如NC通信作者:黄一帆(1954－)，男，教授，博士生导师。Tel:0591-83789305;E-mail:zjhyfang@163．com膜的特定位置上，样品中抗体或抗原经层析作用移基金项目:福建省自然科学基金项目(2009J01047)。动至该特定位置时，与胶体金标记的抗原或抗体特87异性结合，在特定

8、位置由胶体金显色来指示样品中抗控带和检测带，以检测被检样品中的赤羽病毒(aka-体或抗原的存在与否。该技术既可采用双抗体夹心banevirus，AKAV)。试验结果表明，所研制的试纸法检测样品中抗原，又可用间接法检测样品中抗体条敏感性较高(为10TCID50)，特异性较强，适合基(王武军等，2005)。层动物防疫检疫部门尤其是进出