实验4ph值对唾液淀粉酶活性的ppt课件

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1、实验4pH值对唾液淀粉酶活性的影响实验目的：1.通过实验观察pH对酶促反应的影响。2.提高分析问题和动手能力。实验原理淀粉在淀粉酶催化下水解，其最终产物是麦芽糖和葡萄糖。在水解反应过程中淀粉的分子量逐渐变小，形成若干分子量不等的过渡性产物，称为糊精。向反应系统中加入碘液可检查淀粉的水解程度，淀粉遇碘呈蓝色，麦芽糖对碘不显色。糊精中分子量较大者呈蓝紫色，随糊精的继续水解，对碘呈橙红色。根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。在不同酸碱度下，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度也不一样。进而了解pH对酶促反应的影响。实验器材：【器材】：10mm×

2、100mm试管、试管架、恒温水浴箱、记号笔、一次性杯子【试剂】：1．1%淀粉溶液：配制方法：取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水约80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升，冰箱保存。2．稀释唾液：同实验33．缓冲溶液：4．碘溶液取碘化钾2g溶于少量蒸馏水中，再取碘1.27g，完全溶解后加蒸馏水至200ml，贮于棕色瓶中。使用前用水稀释5倍。实验步骤加入物(ml)1231%淀粉溶液PＨ5.7缓冲液PH6.8缓冲液PH8.0缓冲液333100010001摇匀后37℃恒温水浴中保温5分钟稀唾液222取三支试管按下

3、表操作：将上面各管摇匀后放入37℃恒温水浴中保温。放置10分钟后取出，分别向各管加入稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明pH对酶促反应的影响。实验5温度对酶促反应的影响实验目的：1.通过实验观察温度对酶促反应的影响。2.提高分析问题和动手能力。实验原理：同实验4。根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。在不同温度，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度也不一样。进而了解温度对酶促反应的影响。实验器材：【器材】：10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸水浴、记号笔、一次性杯子【试剂】：1．1%淀粉溶液：同实验42．稀释唾液：同实验33．

4、碘溶液取碘化钾4g溶于少量蒸馏水中，再取碘2g，完全溶解后加蒸馏水至300ml，贮于棕色瓶中。实验内容与方法：加入物ml1231%淀粉溶液333PH6.8缓冲液111摇匀后分别于37、沸水、冰浴5分钟稀唾液111摇匀后分别于37、沸水、冰浴10分钟取三支试管按下表操作：表温度对酶促反应的影响取出后，分别向各管加入稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明温度对酶促反应的影响。实验6唾液淀粉酶的活性测定实验目的：1.学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定，加深对概念的理解；2.学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量实验原理：在最适条件下，每分

5、钟催化单位量的底物转化为产物所需的酶量定义为一个活力单位。酶的比活力：用每mg蛋白质酶活力单位数表示，表示酶的纯度。每隔一段时间测定一次水解的横渡一浓度为纵坐标，时间为横坐标作图，在图上找出开始部分线形好的部分求出斜率。进而求出酶的活力与比活力。3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干扰较小。实验器材：【器材】：10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸水浴、记号笔、一次性杯子

6、【试剂】：1．3,5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）：甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2ml10％氢氧化钠中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠；乙液：称取255g酒石酸钾钠，加到300ml10％氢氧化钠中，再加入880ml1％3,5-二硝基水杨酸溶液。将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温下放置7－10天以后使用。2．0.1％葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，冰箱保存备用。实验内容与方法：1、葡萄糖标准曲线的制定取8支试管

7、编号，按下表操作：试剂处理试管编号01234567葡萄糖标准液/ml—0.20.40.60.81.01.21.4蒸馏水/ml2.01.81.61.41.21.00.80.63,5-二硝基水杨酸/ml22222222λ=550nm的吸光值（A）水浴加热5min，迅速取出冷却，在向每管加入21ml的蒸馏水于550nm处测吸光度；