邻菲罗啉分光光度法测定水中微量铁

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1、邻菲罗啉分光光度法测定水中微量铁一、实验目的1．了解分光光度计的结构和正确的使用方法；2．学习吸收曲线的制作方法，理解最大吸收波长的意义；3．掌握朗伯比尔定律的应用。二、实验原理在pH约为5的HAc-NaAc缓冲溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的橙红色络合物，λmax＝510nm,ε＝1.1×104L/(mol·cm)。在510nm处吸光度与其浓度成正比，符合朗伯-比尔定律，用标准曲线法可求得试样中微量Fe2+的测定。如果铁以Fe3+的形式存在，应预先加入盐酸羟胺将Fe3+还原成Fe2+。三、主要仪器与试剂1．仪器722型分光光度计、10mL吸量

2、管，50mL容量瓶。2．试剂(1)铁标准溶液（含铁100μg/mL）；(2)0.1%邻菲罗啉溶液；(3)5%盐酸羟胺溶液；(4)HAc-NaAc缓冲液（pH=4.6）。四、实验步骤1．邻菲罗啉-亚铁吸收曲线的绘制准确吸取铁标准溶液（含铁10μg/mL，用含铁100μg/mL配制）4mL于50mL容量瓶中，依次加入5mLHAc-NaAc缓冲液、2mL盐酸羟胺溶液、5mL邻菲罗啉溶液，用水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟。以水作参比溶液，用1cm比色皿和722型分光光度计在=440-600nm分别测定吸光度A。以所得吸光度A为纵坐标，相应波长λ为横坐标，在坐标纸上

3、绘制A与λ的吸收曲线。从吸收曲线上选择测定铁的适宜波长，一般选用最大吸收波长λmax为测定波长。2．标准曲线的绘制准确吸取铁标准溶液（含铁10μg/mL）0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于六个50mL容量瓶中，依次加入5mLHAc-NaAc缓冲液、2mL盐酸羟胺溶液、5mL邻菲罗啉溶液，用去离子水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟。以不加铁的试剂溶液作参比，用1cm比色皿，在λmax处分别测定吸光度A。以显色后的50mL溶液中的含铁量(µg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制测定铁的标准曲线。3．试样中微量铁的测定准确吸取试样10mL于50mL容

4、量瓶中，按照绘制标准曲线的实验步骤，配制溶液并测定吸光度Ax，从标准曲线上查出对应的铁的质量，并求原试样中铁含量的浓度（µg/mL）。五、数据记录及结果处理1．吸收曲线绘制和测量波长选择由吸收曲线可得，λmax=nm。2．标准曲线的绘制和铁含量的测定若由标准曲线上查出对应的铁含量为cx，则原试样中铁含量的浓度cFe计算：六、思考题1．参比溶液的作用是什么？2．溶液酸度对测定有何影响？3．制作标准曲线和进行其他条件实验时，加入试剂的顺序能否任意改变？为什么？七、注意事项1．为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。2．

5、比色皿使用注意事项：1）每台仪器与比色皿配套，不能与其它仪器上的比色皿调换；2）拿取比色皿时，手指不能接触其透光面；3）装溶液时，先用该溶液润洗比色皿内壁2～3次，被测溶液以装至比色皿的3/4高度为宜，并用滤纸轻轻吸去比色皿外部的液体，再用擦镜纸小心擦拭透光面，直到洁净透明；4）测定系列溶液时，通常按由稀到浓的顺序测定；5）实验完毕，及时把比色皿洗净、晾干，放回比色皿盒中。附722型分光光度计简要操作方法：①预热仪器。为使测定稳定，将电源开关打开，使仪器预热20min。预热仪器和在不测定时应将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，防止光电管疲劳；②选定波长。转动波长调

6、节器，使指针指示所需要的单色光波长。③调节“T＝0”点。打开吸收池暗室盖（光门自动关闭），使读数模式调至[T]上，在调节[0%T]旋钮，使数字显示为“00.0”；④调节T=100％。轻轻盖上吸收池盖（将参比溶液置于光路），调节透光率[100%T]旋钮，使数学显示为“100.0”；⑤测定。使读数模式调至[A]，轻轻拉动比色皿座架拉杆，使被测溶液进入光路，此时显示屏所示数据为该溶液的吸光度A；⑥测量完毕，取出比色皿洗净，晾干，存于专用盒内。关机，拔下电源插头，盖上防尘罩，填写使用记录；