无菌实验室操作规程

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1、无菌实验室操作规程为无菌实验室的操作，无菌实验室的保护提供一个标准化规程，保证实验室操作顺利进行，保证实验结果的准确性。无菌实验宗操作程序很重要，安徽人和净化为您提供。操作程序1、微生物检验的准备工作1・2操作前的准备：1.2.1无菌实验室使用前必须打开无菌实验室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。以保证无菌实验室的沽净度符合要求。1.2.2微生物检验玻璃仪器的清洗1.2.2.1按技术耍求将各种玻璃仪器进行清洗，町用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用白來水充分冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强，可有效地洗去器皿上的油污。洗

2、衣粉和去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附冇一层微小粒了，故要用水多次甚至10次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗，然后倒置于磁盘或木架上，在室内晾干，放烘箱烘干。1.2.2.2玻璃器皿经洗涤后，若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用印來水充分冲洗。1.2.2.3装冇固体培养基的器皿应先将英弃去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液（來苏尔）或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤。带病原菌的培养物最好先行高圧蒸汽灭菌，然示将培养物倒去，再进行洗涤。1.2.2.4盛

3、放一般培养基用的器皿经上法洗涤后，即可使用，若需精确配制化学药品，或做科研用的精确实验,耍求白來水冲洗下净后，再川蒸第水淋洗三次，晾干或烘干后备川。1.2.2.5准备好所用的各种试剂，做好普通营养琼脂或其他选择的培养基。1・3消毒、灭菌微生物检验用器材及场所必须进行灭菌或消毒处理，不同的对彖采用不同的处理方法。1.3.1.高压蒸汽灭菌:工作服、口罩、稀释液等，置高压杀菌锅内，-般采用121°C灭菌半小时，当然不同的培养基有不同的要求，应分别处理1.3.2.火焰灭菌：接种针、接种环等可直接火焰灭菌1.3.3.高温干燥灭菌：各种玻璃器血、注射器、吸管等，置于燥箱屮1

4、60°C灭菌2小时。1.3.4.一般消毒:无菌实验室内的凳、工作台、试悖架、天平、待检物容器或包装均无法进行火菌，必须用其他方法进行消毒处理，采用2%石炭酸或来苏儿水溶液擦拭消毒，工作人员的手也用此法进行消毒。1.3.5.空气的消毒：开启紫外灯照射30-60分钟即可。2、培养基的配制、验证及存储培养基制备的质疑将肓接影响微生物生长。由于各种微生物对其营养要求不完全和同，培养冃的的不同，各种培养基制备要求如下。2.1.根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸係水屮，在使川前对应川的试剂药品应进行质量检验。2.2.PII测定及调节：PH测定要在培养基冷至室温时进行，

5、因在热或冷的情况下，其PH有一定差界，当测定好吋，按计算量加进碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基PH值一•定要正确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需留意因高压灭菌可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、往氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH后再加进。2・3•培养基需保持澄清,便于观察细菌的牛长情况，培养基加热煮沸后,可丿IJ脱脂棉花或绒布过滤，以除往沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净晾干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。2、4•培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要留意不因加热而

6、降低其营养价值，一般12rC15minWnJ-,如为含有不耐髙热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚硏酸钾、卵黄、TTC、抗菌索等，待基础琼脂高压灭菌后凉至50°C左右再加进。1.5.每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。假如是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必耍吋可置4°C冰箱存放。1.6.口前各种干燥培养基较多，每批需川标准菌株进行生长试验或牛化反应观察，各种培养棊用相应菌株生氏试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时

7、也应测PH,使用时需根据产品说明书用量和方法进行。1.7.每批制备的培养基所用化学试剂、灭菌情况及菌株生长试验结果、制作职员等应做好记录，以备查询。3、样品的采集：接到第一检查站通知后，捉前30分钟到达牛产现场，双方确认牛产品种、下馄时间后相互签字后，检验员用75%酒精棉球擦手两次，用灭菌刀取样，放到事先灭好菌的纸袋中，带回放入无菌实验室中待检，并做好标识。4、样品的微生物检验4.1化验员进入无菌实验室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套（或卅75%的乙醇再次擦弑双手），方可进入无菌实验室进行操作。4・2供试品在检查前

8、，应保持外包装完整，不得