遗传实验参考实验二、果蝇唾腺染色体的观察

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1、实验二、果蝇唾腺染色体的观察生01胡璞2010012345一、实验目的掌握取出果蝇等幼虫唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法，并了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点。二、实验原理由于果蝇唾腺染色体DNA经过多次复制（10-15次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中染色体总是处在体细胞联会状态，故在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，并可看到具有特异性的带纹。我们挑取果蝇唾腺并制成玻片进行观察。三、实验用具及材料双筒解剖镜一台、显微镜一台、解剖针两支，果蝇三龄幼虫若干、生理盐水、改良苯酚品红染液、滴管、吸水纸四、实验步骤1、调试双筒解剖镜在

2、调试时，先在载物台上放一张有字的纸作参照，用粗螺旋调节到一个固定位置，以看清载物台纸上的字为准。（由于我使用的解剖镜无口色底面，故无需后续增大反差步骤）2、剥离唾腺在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水（防止幼虫干涸）,选择发育充足、肥大、未化蛹的三龄幼虫（唾腺和唾腺细胞发育良好，而化蛹后的唾液腺细胞则分布会变得密集）置于载玻片上。两手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。解剖针按压住虫体后端三分之一的部位（查资料发现果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处）,压住幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部，缓慢用力向前拉开头部。（后来采用9字班学长的方法，将幼虫反过来

3、挑唾腺，果然更加方便了些）唾腺随即被拉出。是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。3、染色吸去生理盐水，滴加一滴改良的苯酚品红染液染色lOmin到15mino（为了使染色液的浓度得到保障，我在滴加了一滴染液后小心吸走部分染液，再加一滴染液，这样可以避免生理盐水吸取不尽导致染液浓度不够）4、压片染色完成后，盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用拇指压住盖玻片一边缘（防止滑动导致模糊）,然后用解剖针后端轻轻敲击，将盖玻片压实。5、镜检因为本次实验需要经过盖玻片压片的过程，故并没有使用

4、油镜，而是采用10X40的放大方式进行观察。五、观察结果及讨论在感觉第四次压片染色效杲不错Z后，我开始仔细寻找显微摄影的对象，并最终找到了两个还不错的细胞。其中一个伸展的不太开，带纹也没有另一个明显；另一个带纹明显，但是染色体有些疑似断裂。权衡再三，我比较倾向于带纹清晰的，因为“带纹清晰且能观察出很多染色体情况，并以Z方便研究”是杲蝇唾腺染色体成为实验研究对象的重要原因，并II这也是能够判断出各条染色体归属的依据。而选出的图能够较好的分辨出染色中心、带纹、甚至是疏松区和巴尔比尼环，即使有断裂也可以判断出断裂的接口，所以我选择了她作为提交的结果。（见

5、图1）（详细分析见图2）图1果蝇唾腺染色体显微摄影图（10X40）图2杲蝇唾腺染色体显微摄影后期处理图根据图2我们很容易发现蓝色的染色屮心，及五条黑色指岀的从染色屮心岀发的染色体（•与资料上所述一致）,其中红色的部分为疑似断裂的染色体，但是很明显可以发现断裂的部分是与上下两条黑线指出的部分相接合的，故可以复原。（可能会损失部分RNA密集的信息，但是远远比看不清这部分带纹的图要好得多）六、实验总体讨论由于事先查阅了资料并采用了学长介绍的颠倒幼虫取唾腺的方法，一开始便很顺利地取岀了果蝇幼虫唾腺。但是最后还是做到第四次压片才找到较为理想的结果。原因是第一

6、次发现留下来的腺体中含有没有拨干净的脂肪粒和虫体管腔，于是我又做了第二次。第二次又发现压片时垫2层吸水纸并正常锤压把染色体压碎了。于是第三次加厚了压片垫的纸（四层），减轻了用力，但却发现才12min的染色时间会使带纹不太清晰，于是开始准备第四次压片。这次特意染色了20min（虽然后来才知道，应该再加长染色时间才较好），结果果然好多了，可惜没有出现分散得开、看得清带纹又没有断裂的染色体。七、致谢感谢吴老师和助教们对我们思考的引导以及显微摄影技术操作的讲解，感谢我的同桌王雨川与我对剥离果蝇唾腺技术的讨论，没有你们我不会享受那看似“煎熬”的数个小时，更不

7、会得到我觉得满意并有收获的成果！八、参考资料【1】《普通遗传学实验指导》张贵友、吴琼、林琳等清华大学出版社【2】互联网资料[3]5字班丛乐实验报告