专题一基因工程的基本操作程序1

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1、复习提问：1、基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过和等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。2、基因工程中的限制酶：来源、作用和结果。3、基因工程中的针线：种类、来源、作用。4、基因工程中的运载体：种类、特点。体外DNA重组转基因DNA分子水平上ATCATGGCTTAADNA连接酶CGCTTAAGAATTDNA聚合酶基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定第一步：目的基因的获取1、目的基因主要是指编码蛋白质的

2、结构基因2、方法：1)、人工合成2)、从基因文库中获取3)、利用PCR技术扩增(基因比较小，序列已知)基因文库基因组文库部分基因文库－－如：cDNA文库聚合酶链式反应基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）基因文库？将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因依据：1、基因的核苷酸序列2、基因的功能3、基因在染色体上的位置4、基因的转录产物—mRNA5、基因的表达(翻译)产物—蛋白质受体菌的整个群体包含了这种生物的全部基因基因组文库的构建模式图基因组文库与部分基因文库的

3、关系cDNA文库的构建模式图杂交双链(单链RNA/单链DNA)单链DNA反转录酶双链DNA(cDNA)某种生物的mRNA某种酶DNA聚合酶与载体连接后导入受体菌贮存，组成cDNA文库原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区启动子终止子内含子外显子启动子终止子真核细胞的基因结构非编码序列转录转录mRNA翻译多肽链初始mRNA剪接成熟mRNA翻译多肽链出核孔原核、真核基因表达比较启动子.VS.起始密码/终止子.VS./终止密码存在分子：作用：DNA(基因)启动/终止转录mRNA起始/终止翻译mRNA中存在启动子/终止子的序列吗？存在外显子/内含子吗①概念：PCR全称为_______________

4、，是一项在生物____复制________________的核酸合成技术③条件：②原理：__________聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸1对引物DNA聚合酶(Taq酶)利用PCR技术扩增目的基因能量变性复性延伸1.变性（90℃-95℃）双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________氢键单链DNA2.复性(55℃-65℃)温度降低，与DNA模板结合，形成局部______。双链引物3.延伸（70℃-75℃）在的作用下，连接，合成与模板互补的DNA链。脱氧核苷酸Taq酶(二)利用PCR技术扩增目的基因DNA复制PCR技术不同点解旋方式场

5、所酶温度条件引物联系PCR技术与DNA复制的比较解旋酶催化高温变性解旋细胞内主要在细胞核内细胞外主要在PCR扩增仪内解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐热的DNA聚合酶（Taq酶）细胞内温和条件需控制温度，在较高温度下进行需要（一对）不需要模板、原料均相同、均需能量。第二步：基因表达载体的构建（核心）2、基因表达载体的组成？①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代②使目的基因能够表达和发挥作用启动子目的基因终止子标记基因1、基因表达载体构建的目的？（P162）抗生素抗性基因质粒DNA分子限制酶处理两个切口（位点）获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口(位点)两

6、个黏性末端用相同的限制核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA（如质粒），目的基因和载体DNA的两端形成相同的黏性末端，在DNA连接酶的作用下，将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子。它们有什么作用？a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因位于基因的首端,是mRNA结合位点位于基因的末端,终止转录检测目的基因是否导入受体细胞抗生素抗性基因