抗体的应用及选择

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1、抗体的应用及选择章进军技术支持QQ：248673767凯基生物是专业从事生物试剂研发、生产、销售和技术服务的国有公司凯基生物现具有四条产品线：生命科学通用工具库、医学研究工具库、药物发现和开发工具库、核质与核信号研究工具库，五千余种产品，上万种品种规格供客户选择抗体(Ab):是B细胞受抗原刺激后，分化为浆细胞合成并分泌的一类能与相应抗原特异结合的球蛋白。抗体的应用医疗领域：诊断：已知抗体查未知抗原；血型、乙肝、SARS、肿瘤相关抗原等已知抗原查未知抗体；HIV、伤寒、自身免疫病等预防：应急预防（破伤风，Rh不合的新生儿溶血等）治疗：感染、抗移植排斥、抗炎、抗肿瘤科研：

2、westernblotELISAFACSIHCIP…WesternblotPrimaryantibody选择？Secondaryantibody酶标二抗：辣根过氧化酶（HRP)碱性磷酸酶（AP)葡萄糖氧化酶（GOT)种属性:兔(与一抗来源相同）来源：山羊（不能与抗原来源相同）ELISA与westernblot不同点二抗：必须能与抗原结合但是不能与一抗（包被抗体）结合抗原：小鼠一抗：兔来源二抗：不能是兔来源的免疫组化传统方法即用型快捷免疫组化聚合物:辣根过氧化物酶标羊抗鼠、兔（一抗）碱性磷酸酶酶标抗鼠、兔（一抗）免疫组织化学的应用1.确定细胞类型2.确定细胞类型3.确定细

3、胞类型4.确定细胞类型5.确定肿瘤分期6.寻找感染病因…..FACS液流系统：将细胞单个压入流动室激光发射器发出所需要的波长的激光前向散射光检测器光学滤镜侧向散射光检测器目前流式仪可以检测的类别细菌浮游生物红细胞淋巴细胞中性粒细胞单核细胞DM：1um——15um荧光标记法直接染色法：省时，一步染色特异性强可以同时进行多种颜色的染色间接染色法：荧光强度往往比较强荧光颜色可以随时更换耗时非特异性染色干扰实验结果，特别是阳性率低的时候。Biotin染色：特异性较强的荧光识别灵活选择颜色只能使用一种带生物素的抗体在全血中会有非特异性染色荧光抗体的介绍用各种方法将单克隆抗体和流式

4、仪能够检测到的荧光蛋白结合在一起就是流式操作中所用的荧光抗体流式实验流程介绍1，将荧光抗体和细胞一起培养2，抗体结合到细胞表面所对应的特殊抗原上3，过流式细胞仪的时候，在激发光的照射下，抗体的荧光部分发出荧光4，抗体发出的发射光被流式仪所收集根据目前可见的三种激发光分蓝色激发光405nm绿色激发光488nm红色激发光635nm细胞结构细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量染色体分析细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体细胞凋亡在上述信号基础上的细胞分选流式细胞术的细胞学应用流式细胞仪的

5、临床应用HIV免疫分型，CD4绝对计数白血病和淋巴瘤的免疫分型肿瘤的细胞周期和倍体分析网织红细胞计数细胞移植的交叉配型和免疫状态监测干细胞计数残量白血病细胞检查HLA-B27检查血小板功能及相关疾病流式细胞仪的科研应用免疫功能研究癌症病人的多药耐药性细胞动力学功能研究动物性别筛选海洋与环境微生物分析染色体分选AnnexinV-FITC/PI双染色法B淋巴细胞检测淋巴细胞B淋巴细胞Dynabeads（chipisolationactivation)抗体的选择一抗：（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息（2）确定你的实验类型，ELISA，WB，IHC，ICC

6、，还是FACS。（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat二抗（1）种属来源（2）标记物的选择保存注意事项收到抗体后12000rpm离心3min后再打开管盖进行分装和保存！大部分抗体是保存在-20度。酶联抗体：保存在4度荧光抗体：避光保存4度抗体说明书thanks