分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中莱克多巴胺

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1、第1期黄怡，等：分子印迹固相萃取一高效液相色谱法测定饲料中莱克多巴胺·57·莱克多巴胺(ractopamine，RAC)是一种一受盐酸莱克多巴胺对照品(含量≥98．5％，德国体激动剂类药物，可促进动物体内脂肪向蛋白质转Dr．Ehrenstorfer公司)；丙烯酰胺(acrylamide，化，表现出营养再分配效应。美国食品药品管理局AM，分析纯；上海润捷化学试剂有限公司)；4一乙烯(FDA)于1999年允许该药品作为兽药在猪饲料添吡啶(4-vinylpyridine，4-VP)、2-乙烯吡啶(2一加剂中使用，随后南美和亚洲一些国家和地区也批vinylpyridine，2-VP)及乙二醇

2、二甲基丙烯酸酯准使用。但由于其潜在的毒副作用，该药物在欧(ethyleneglycoldimethacrylate，EGDMA)均购自洲一些国家尚未批准使用，我国也严禁在畜牧业生美国Sigma—Aldrich公司，使用前用活性炭吸附去产中使用各种一兴奋剂类药物。随着近年来克伦除阻聚剂；偶氮二异丁腈(azobisisobutyronitrile，特罗检测方法的成熟与监测力度不断加大，RAC已AIBN)、乙腈和甲酸均为色谱纯；甲醇、二氯甲烷、乙成为目前非法使用最为严重的一受体激动剂之一，酸乙酯、高氯酸、戊烷磺酸钠等试剂均为分析纯(广被称为“第二代瘦肉精”。RAC在动物饲料中的蓄州化学试剂

3、有限公司)；实验用水为去离子水。意添加会通过饮食给人类健康带来潜在威胁，因此1．2分子印迹聚合物的制备建立一种快速、高选择性、重现性好的分析方法用于1．2．1不同致孔剂的MIPs的制备监测饲料中RAC具有重要的实际意义。分别将1．0mmolRAC溶解于6mL乙腈一三乙目前，有关动物组织、尿液等基质中RAC残留胺体系、丙酮一三乙胺体系、甲醇一三乙胺体系与氯仿一的检测方法较多，但饲料中RAC的检测方法较甲醇．三乙胺体系中，加入4．0mmol丙烯酰胺(或少，主要有高效液相色谱法(HPLC)’、气相色谱一4一VP及2一VP)，超声混合5min，然后加入20．0质谱法和液相色谱一串联质谱法。这

4、些分析方mmolEGDMA和30．0mgAIBN，超声5min，于冰法和标准为动物组织、尿液、牛奶及饲料等试样中浴上吹高纯氮气2min，密封，置于恒温振荡水浴锅RAC筛选及确证分析提供了可靠依据。但这些分中，在60℃下聚合反应24h，得到块状聚合物。将析方法的前处理一般都采用传统的固相萃取小柱聚合物磨碎、过筛，收集200～400目之间的颗粒(粒(如Cmixed—modecationexchange(MCX)等)径为38．5～74m)，用甲醇反复沉降以除去细小净化，缺乏选择性，特异性不强，导致大量基质共萃颗粒。然后分别装入200mm×15mm玻璃柱，用取而影响目标分析物的测定。分子印迹

5、固相萃甲醇一乙酸(9：1，v／v)溶液洗涤去除模板，再用甲醇取(molecularlyimprintedsolid—phaseextraction，洗去乙酸，真空干燥12h，备用。MISPE)是近十年快速发展起来的用于样品前处理1．2．2非印迹聚合物的制备净化的高选择性新技术，已成功应用于多个领域复非印迹聚合物(non-imprintedpolymers，杂基质中目标化合物的分离、净化和富集。本NIPs)的制备除在制备过程中不加模板分子外，其实验以RAC为模板分子，丙烯酰胺为功能单体，乙他步骤同1．2．1节。二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，合成了对RAC具有1．2．3正交试验设计高选择吸

6、附性能的聚合物，建立了基于分子印迹固以AM为功能单体，固定模板分子RAC为0．5相萃取的HPLC测定各种饲料基质试样中RAC的mmol、致孔剂乙腈用量为3mL，考察AM用量方法，为饲料中非法添加RAC的监测提供了有利(A)、EGDMA用量(B)、三乙胺用量(C)和AIBN支持。用量(D)4个因素，进行Lq(3)正交试验。通过固相萃取加标回收试验，评价各因素对聚合物性能的1实验部分影响。1．1仪器与试剂1．3样品前处理Waters2695—2475型高效液相色谱仪(Waters1．3．1提取公司)；Agilent1100型高效液相色谱仪(Agilent公称取一定量的空白试样(预混料A1

7、．0g，添加司)；SHA—B型恒温水浴振荡器(常州国华电器有剂B1．0g和配合饲料Cl0g)于250mL玻璃具塞限公司)；ZK一82BB型电热真空干燥箱(上海市实三角瓶中，加入合适浓度的RAC标准溶液100L，验仪器总厂)；HS10260D型超声清洗机(德国静置20min，加入0．2％盐酸一甲醇(10：90，v／v)提Benchtop公司)；UNIVERAL32R型高速台式冷冻取液100mL，振荡30min，于6000r／min速率下离离心机(德国Hett