蛋白质的生物合成1

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1、1第二节原核生物DNA复制特点只有一个复制起始点双向复制复制速度快引物和冈崎片段长可以连续发动复制2大肠杆菌DNA聚合酶三类DNA聚合酶Ⅰ---多功能酶5’-3’DNA聚合酶Ⅰ的功能5´3´聚合作用5´3´外切酶3´5´外切酶活性功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补，切除引物。3DNApolⅠ利用3´→5´外切活性切除错配的碱基，同时利用5´→3´聚合活性补回正确的核苷酸，这种功能称为即时校读(proofread)。DNApolⅠ的5´→3´外切酶作用可以与其聚合作用同时发生，产

2、生缺口平移(nicktranslation)、链的置换及模板转辙现象。4碱基配对正确，DNApolⅠ无活性3´-5´外切活性5´-3´聚合活性DNApolⅠAGdCTPCG5´3´5´3´DNApolⅠ的即时校读功能5323个氨基酸小片段5核酸外切酶活性大片段/Klenow片段604个氨基酸DNA聚合酶活性5核酸外切酶活性N端C端木瓜蛋白酶DNA-polⅠKlenow片段是实验室合成DNA，进行分子生物学研究中常用的工具酶。65'ucgagcuag-OH3'5'ucgagcuagDNApoldN

3、TP5´3´聚合作用3'agctcgatcgtagcctagcgtagcagtgcacgatc5'3'agctcgatcgtagcctagcgtagcagtgcacgatc5'catcggatcgcatcgtcacgtgctag3'75’3’内切酶外切酶外切酶与内切酶作用图解5´3´外切酶活性的功能切除引物，切除突变片段5’3’85´AGCTTCAGGATA3´

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14、3´TCGAAGTCCTAGCGAC5´35外切酶活性53外切酶活性?能切除突变的DNA片段。能辨认错配的碱基对

15、，并将其水解。DNA聚合酶Ⅰ的核酸外切酶活性93’5’外切酶活性校读错配碱基10模板聚合酶活性位点引物3′→5′外切酶位点11DNA-polⅡ（120kD）DNA-polII基因发生突变，细菌依然能存活。它参与DNA损伤的应急状态修复。12功能：原核生物复制延长中真正起催化作用的酶DNA-polⅢ(250kD)10种亚基组成的不对称异源二聚体13可滑动的夹持器亚基催化亚基3´→5´外切酶亚基前导链合成后随链合成夹持器装置催化亚基亚基保持核心酶的二聚体结构14α亚基具有5′→3′方向合成DNA的催化活性ε亚基

16、具有3′→5′外切酶活性，起校对功能，可提高聚合酶Ⅲ复制DNA的保真性亚基可能加强α亚基的作用β亚基犹如夹子，功能是识别引物、夹住DNA分子向前滑动亚基起着促使核心酶二聚化的作用其余的亚基构成-复合物，主要功能是帮助亚基夹住DNA（也称夹子装置器），并有增强核心酶活性的作用15大肠杆菌三种DNA聚合酶比较DNA聚合酶Ⅱ分子量每个细胞的分子统计数5´-3´聚合酶作用3´-5´核酸外切酶作用5´-3´核酸外切酶作用转化率主要功能活性（nt/min）DNA聚合酶ⅠDNA聚合酶Ⅲ（复合物）109，000400+

17、++1校读,修复1000120，00040++-0.05400，00010-20+++50复制100000特性不清填补缺口501617大肠杆菌基因组DNA复制的基本过程起始起始部位的解链oriCDnaA蛋白结合9bp序列13bp重复序列区解链单链结合蛋白结合形成开放复合物18局部形成引发体DnaC、B、G和起始点DNA形成复合物，其蛋白质部分在链上移动到合适位置，根据碱基配对的原则，开始催化RNA引物的合成19复制的延伸半不连续---前导链的连续合成，随从链合成一段段冈崎片段20复制的终止oriC终止序列复制叉

18、终止区终止序列缠绕的环状DNA分子拓扑异构酶II独立的环状DNA分子2021原核生物基因组DNA复制的典型模式θ型复制---复制从oriC开始以顺时针和逆时针两个方向进行主要的复制方式22原核生物DNA复制的调节复制起始频率的调节主要调节复制的起始频率DnaA的浓度对复制的起始具有正调控作用复制频率与细胞分裂周期相适应的机制控制复制起始点的甲基化修饰亲代单链A甲基化DNA与细胞膜结合，DNA的甲基化受到抑制OriC中的GATCDamSeqA子代DNA中的A被甲基化Dam2324第三节真核生物DNA复制1.真核生

19、物染色体DNA复制的共同特点复制时要解开和重新合成核小体结构A.复制速度慢于原核生物—克服核小体结构的空间阻碍B.组蛋白合成与DNA复制同步进行，使DNA边复制，边组装成核小体252.多起点复制3.RNA引物片段及冈崎片段长度小于原核生物4.真核生物染色体复制完成后在再进行下一次的复制26真核生物染色体DNA复制过程复制的聚合酶和辅助因子五种—α、β、γ、δ、ε分别起着不同的作用真核生