医学微生物第12次实验

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1、白喉杆菌结核杆菌芽胞杆菌7/15/20211实验目的：通过感性认识，加深对白喉杆菌、结核杆菌、芽胞杆菌生物学性状的印象和记忆。通过实验掌握两种染色法。7/15/20212一、白喉杆菌白喉杆菌（C.diphtheriae）是棒状杆菌属中致病性最强的细菌，是白喉（diphtheria）的病原菌。白喉杆菌在患者鼻、咽、喉等部位繁殖并产生强烈外毒素，引起感染局部形成假膜和全身中毒症状。7/15/20213白喉杆菌实验内容：（一）观察白喉杆菌的形态（阿尔伯染色)（二）观察白喉杆菌在吕氏血清斜面上和亚碲酸钾培养基上的生长情况（

2、示教）（三）观察白喉杆菌毒力试验（示教）7/15/20214实验材料：阿尔伯（Albert）染色材料：接种环、酒精灯、生理盐水玻片1片/人白喉杆菌的吕氏血清斜面培养物1支/2人阿尔伯染色液1套/2人染色缸，染色架，胶瓶1套/2人吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸7/15/20215（一）阿尔伯（Albert）染色实验方法：步骤涂片→干燥固定→阿尔伯“甲液”染7-10分钟后水洗→阿尔伯“乙液”染1分钟后水洗（将观察结果绘图）7/15/202167/15/20217（二）观察白喉杆菌的生长情况（示教）亚碲酸钾培养基吕氏血清

3、斜面亚碲酸钾培养基吕氏血清斜面7/15/20218（三）观察白喉杆菌毒力试验（示教）平板毒力试验（Elek平碟法）白喉外毒素原理：毒素抗毒素中和(双向琼脂扩散)7/15/20219白喉杆菌毒力试验（Elek平碟法）7/15/202110二、结核杆菌（一）抗酸染色法(复染法)（二）观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长情况（示教）7/15/202111抗酸染色法原理抗酸性菌体内含脂类物质较多，如结核杆菌（脂质占菌体干重的20～40%，占胞壁干重的60%）体内含有分枝菌酸（脂类），此物质具有抗酸的性质。染色时，它与石炭酸复红

4、结合牢固，能抵抗酸性酒精的脱色作用，同时脂类又不易透过细胞膜，不能被脱色，因此抗酸菌能保持复红的颜色。相反，非抗酸性菌体内含脂类少，易被酸性酒精脱色，脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉，最后被复染成蓝色。7/15/202112（一）抗酸染色法(复染法)步骤：取痰涂片1片→固定→石炭酸复红染7—10分钟后水洗→3%盐酸酒精脱色3—5秒，重复3次，然后水洗→碱性美蓝复染2分钟后水洗→自干或用吸水纸吸干，然后在油镜下观察结核杆菌的形态、排列及染色性。（将观察结果绘图）7/15/202113（二）观察结核杆菌在罗氏培养基上的生长

5、情况（示教）7/15/202114三、芽胞杆菌(G+)（一）观察炭疽杆菌的形态和菌落特点（示教）（二）观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点（示教）7/15/202115（一）观察炭疽杆菌的形态和菌落特点（示教）形态：致病菌中最大的细菌菌体粗大，两端平截或凹陷。竹节状排列革兰氏染色阳性芽胞荚膜7/15/202116炭疽杆菌7/15/2021172.观察炭疽杆菌在血平碟上的生长专性需氧，灰白色粗糙菌落，边缘呈卷发状，周围无溶血环，（细菌有致病性）。与枯草杆菌对比（示教）.对比观察枯草杆菌在血培养基上的生长情况：专性需氧，菌

6、落周围有溶血环，（细菌无致病能力）。7/15/202118（二）观察产气荚膜杆菌的形态和生长特点（示教）形态(复习)生长特点汹涌发酵现象7/15/2021191.观察产气荚膜杆菌的形态结构是G+大杆菌，菌体粗大，两端钝圆,散在排列。芽胞呈卵圆形，芽胞宽度不比菌体大，位于中央或末次端。培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。位于菌体中央或近极端。菌体周围可形成荚膜。7/15/202120汹涌发酵现象在牛乳培养基中分解乳糖，产酸使酪蛋白凝固；产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，甚至冲开管口棉塞，气势汹猛。7/

7、15/2021211、显微镜（油镜）的使用和保护方法（1）提供一张细菌玻片标本，要求能正确使用油镜观察到细菌的基本形态；（2）掌握显微镜（油镜）的保护方法2、血清对倍稀释法（1）用生理盐水将血清进行对倍稀释，终浓度达到1/2，1/4,1/8三个稀释度；（2）掌握血清对倍稀释的原理和方法，能正确使用刻度吸管。3、玻片凝集试验（1）要求用伤寒诊断血清，采用玻片凝集试验的方法检测待检细菌是否为伤寒杆菌；（2）要求操作方法、步骤正确，能准确判断结果；（3）无菌操作正确。4、革兰染色法（1）口试回答细菌涂片的制作方法；（2）

8、将一张已涂好的细菌玻片进行革兰氏染色；（3）要求染色步骤及各项染色时间正确，操作熟练。5、细菌划线分离培养技术（1)将细菌分区划线到普通琼脂平碟上（2）要求划线分区正确，接种划线手法正确、熟练（3）无菌操作正确6、液体培养基的细菌接种方法（无菌操作）（1）将菌种接种到液体培养基内（2）要求各环节无菌操作正确7、细菌在培养基中生长情况及细菌特殊结构的观察（1）