血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法

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1、万方数据．啊南高放房区2012年第5期(总第171期)血凝和血凝抑制试验常见问题及解决方法蔡文杰1。邱立新躺。邱美珍1。杜丽飞1(1．湖南畜牧兽医研究所，湖南长沙410131；2．湖南省动物疫病预防控制中心，湖南长沙410007)摘要：血凝和血凝抑制试验是目前我国各地开展疫病诊断、流行病学调查、免疫程序帝】定夏免疫效果监测等的主要手段之一。由于其涉及红细胞凝集及抗原抗体的特异性反应，操作过程常受多种因素影响，容易造成偏差。文章针对血凝和血凝抑制试验中常见问题，从血凝和血凝抑制试验的缓冲体系、血凝板或微量振荡器、1％鸡红细胞悬液配制等方面进行分析，并总结经验

2、和解决方法。关键词：兽医；免疫学；血凝试验；血凝抑制试验；动物防疫中图分类号：S852．5文献标识码：B1前言血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)由于能同时进行大量样本分析，试验过程易于操作以及结果快速、准确等特点而成为目前我国各地疫病诊断、流行病学调查、免疫程序制定及免疫效果监测等的主要手段之一，与酶联免疫吸附试验(EuSA)具有同样重要的作用。近年来，经常在技能比武、兽医实验室考核和实验室比对试验中采用血凝和血凝抑制试验方法检测新城疫或禽流感抗体，试验所需时间不长，涉及到的实验因素在血清学试验中有一定的代表性。同时该试验具有可比较性和可重复性，试验结

3、果容易观察和辨认，能客观反映出实验人员的水平和能力的优点。另外，由于近年来动物防疫工作的需要，各地广泛采用这一方法评价免疫抗体水平，有的把试验结果直接与目标管理考核和绩效考评挂钩，有时一个试验结果的好坏就决定排名先后，甚至是年度工作绩效和收入。因此，各地兽医实验室非常重视这一实验。不仅国内如此，其他国家也经常在教学和实验室技能比赛，比对试验(包括人员之间比对、实验室之间比对)等方面运用※通讯作者：邱立新文章编号：1006—490712刚2)05—0039一03该试验。然而，这一看似简单的方法，如果不注意很可能不同的人做同一份血清，其结果有天壤之别。为了更好

4、地掌握这项检验技术，现总结了一些经验，供同行参考与交流。2缓冲体系的配制根据新城疫和禽流感的相关国家标准㈣，HA、腿试验的缓冲体系是o．01MpH7．2PBs，保持整个试验各步骤缓冲体系的一致性很重要，不论在洗鸡红细胞、配制1％鸡红细胞，还是在做HA试验或HI试验都应使用这种缓冲液。实验室的缓冲液最好现配现用，高压灭菌后使用，一般放置冷藏冰箱不超过1个月，当发现PBs中有絮状沉淀物时不宜再用。配制PBs时要注意的是，如果按照上述标准文本中磷酸氢二钠的用量是1．449／L，而我们常用的磷酸氢二钠中含12个水分子，因此用量要换算增加。一般隋况下PBs配好后不需

5、调pH值，配好后高压灭菌，冷藏保存备用。若需要调则用lN的NaoH调pH值到7．2。值得引起注意的是现在市面上买的pH试纸很多不准确，有条件的实验室最好用酸度计测试已经购买的pH试纸。现在市面上【3】何书贵，初晓红．加强猪人工授精站管理，大力推广生猪人工授精技术【J】．中国畜牧兽医文摘，2011，(4)：39．[4】李日伟，刘金兰，等．普及猪人工授精技术促进科学养猪[J]．养殖与饲料，2009，(2)：12～14．【5】孙红旗．现代猪人工授精技术推广措施田．现代农业科技，2011，(15)：326～328．牧业，201l，(4)：15．【7】罗旭芳，张守全

6、，等．工厂化猪场人工授精技术应用研究[J】．江西农业大学学报(自然科学)，2002，24(4)：513～516[8]郭应林，伏彭辉，公猪精液品质的影响因素及其改进途径[J】．畜禽业，2009，(9)：46～49．【6】韩学伟．提高猪人工授精技术的四项专业措施【J】．北方HunanAnimalscienceandVetennaryMedicine，No．5，2012．(TotalNo．171)寝丽可丽R狐西i而39万方数据M南专放墨匿2012年第5期(总第171期)也有小包装的PBS粉购买。每包可配制1000mLPBs溶液，使用非常方便。根据我国禽流感研究先

7、驱唐秀英老师的经验，禽流感试验中包括琼扩和HA、HI试验，还是用略偏酸性的PBs较好(pH6．8)。我们的经验是在没有PBS的情况下用复方氯化钠注射液(林格氏液)也有类似效果。3血凝板或微量振荡器的使用采用一次性血凝板做实验是最好的，尤其是在做比对试验这种量小又是关键性的试验时。目前市面上可重复使用的聚苯乙烯有机玻璃板购买时要注意底角是否为90度，底面是否光滑，清洁，如果不清洁，清洗后可用棉签醮酒精把孔底擦干净。有机玻璃血凝板的好处是可以叠放，在做大批量检测试验时节省空间。用过的微量血凝板应立即用高压自来水把每个孔都冲洗干净，甩干，倒扣温箱中烘干以便下次使

8、用。微量振荡器使用时应注意振动不宜过大，时间不能太长，一般振动10