伤寒沙门菌bcfD基因的克隆表达

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1、伤寒沙门菌bcfD基因的克隆表达胡勇1，2，从延广1，邱蓉荣2，张云茹2，胡福泉1（1第三军医大学微生物学教研室，重庆400038；2重庆理工大学化学与生物工程学院，重庆400050）摘要：目的：构建伤寒沙门菌BcfD基因的原核表达质粒，表达融合蛋白并分析其抗原性。方法：通过PCR方法从伤寒沙门菌Ty2菌株基因组中扩增bcfD目的基因，经克隆和亚克隆构建原核表达载体pET-30a-bcf，将该重组质粒转化E.coliBL21(DE3)并进行原核表达，用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达蛋白。结果

2、：扩增到与bcfD基因预期大小相符的片段，测序证明与bcf基因序列完全一致，SDS-PAGE显示该蛋白主要以包涵体的形式表达，相对分子量为42kDa，免疫印迹分析表明，表达产物与经用大肠杆菌吸附处理后的伤寒病人血清能进行特异性免疫反应。结论：成功构建了bcfD基因原核表达载体并在大肠杆菌中表达了目的蛋白，为BcfD蛋白的生物学特性、致病机理研究奠定了基础，并有利于预防、诊断治疗新靶位的开发。关键词：伤寒沙门菌，抗原，bcfD基因，原核表达中图分类号：R378；Q939.93Cloningande

3、xpressionofbcfDgeneofSalmonellaentericaserovartyphiHUYong1，2CONGYanguang1QIURongrong2ZHANGYunru2HUFuquan1（1DepartmentofMicrobiology,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038；2DepartmentofBiotechnology，ChongQingInstituteofTechnology，ChongQing4000

4、50）基金项目:国家自然科学基金资助项目(30500435)supportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(30500435)作者简介：胡勇，男，四川宣汉县人，博士研究生，副教授，主要从事抗微生物感染方面的研究。通讯作者：胡福泉，电话：(023)68752240，Email：fuquanhoo@yahoo.com.cn丛延广，电话：(023)68752239，Email:ygcong@tmmu.edu.cnAbstrat:Objective:

5、ToobtainfusionproteinofBcfDandanalysisitsantigen,theprocaryoticrecombinantplasmidexpressingBcfDgeneofS.entericaserovartyphiwasconstructed.Methods:ThegenesequenceofbcfDofSalmonellaentericaserovartyphistrainty2wasamplyfiedbyPCR,thensubclonedintoprocary

6、oticexpressionvectorpET-30a.TheresultedvectorpET-30a-bcfwastransformedintocompetenceE.coliBL21(DE3),thenwasinducedbyIPTG.TheexpressedproteinwasanalysisedbySDS-PAGEandWesternblot.Results:TheresultshowedthatanexpectedDNAsegmentwasamplyfiedandconfirmedb

7、ysequencing.TheBcfDproteinwasproducedabundantlyasinclusionbodyshowedbySDS-PAGEandthemolecularweightofexpressedproteinwasabout42kDa.TheWesternblotanalysisshowedthattheproteinhadtheantigenicactivitywithtyphoidserawhichadsorbedwithE.coliBL21(DE3)withpET

8、-30a.Conclusion:ThesuccessfulexpressionofBcfDproteininE.colihasprovidedusefulltoolsforstudiesonthebiologicalactivityofBcfDproteinandmaybebenefittotyphoidpreventionandpathogenisis.Keywords:S.entericaserovartyphi;antigen;bcfDgene;procaryoticexpression伤