实验二DNA与RNA的化学显色反应

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1、实验三核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察p220作业：1、说明DNA和RNA的亚细胞定位在哪里?为什么？2、解释一下本实验中设立对照组的必要性是什么，三氯乙酸和丙酮各起什么作用实验原理Unna染色法主要成分：甲基绿-派洛宁混合染料（碱性染料）原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是DNA和RNA对甲基绿-派洛宁混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来“样品的固定”王金发书p37目

2、的：迅速杀死细胞，稳定细胞的化学成分，以便在后面的处理、切片时不被破坏。固定使得细胞大分子交联而保持在一定位置上，不至于在后面的染色等处理过程中移位或丢失而产生人工假象。常用的固定液：(醛类：甲醛、戊二醛)Unna染色法实验步骤撕取洋葱内表皮↓小离心管Carnoy固定剂15min↓95%酒精复水5min↓70%酒精复水5min↓H2O5min↙↘小离心管表面皿中实验组对照组→5%三氯乙酸（TCA）↙90℃保温,15minH2O5min↙Unna染液20min(室温)↓H2O漂洗几秒后丙酮分色6-10S

3、ec↓H2O洗片刻↓水压片分别镜检观察Unna法背景知识核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸：DNA和RNA，它们具有类似的化学组成，即均由含氮碱基，戊糖和磷酸组成，可表示如下:磷酸核糖（RNA）核酸核苷酸戊糖脱氧核糖（DNA）核苷A、G、C、U(RNA)碱基（嘌呤/嘧啶）A、G、C、T（DNA）DNA是染色体的主要成分，在细胞核内呈双螺旋结构。RNA是单链线形，主要有三种类型:核糖体RNA(rRNA)转运RNA（tRNA)信使RNA（mRNA)rRNA含量大，占细

4、胞RNA总量的80％左右，是核糖体的重要组成部分，而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的。tRNA约占全部RNA的15％，它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。mRNA的含量最少，只占5％左右，它是以DNA为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。rRNA基因的转录•快速生长的哺乳动物细胞中(培养的Hela细胞),转录生成的RNA总量的80%-rRNA;15%-tRNA;编码蛋白质的mRNA量少•处于生长中的高等真核细胞一般需107核糖体以确保蛋白质的合成,so真核细胞中

5、有关编码核糖体基因(ribosomalgene)会在染色体的核仁区以100-5000个重复copy串联成中度重复序列,成簇分布在少数特定染色体的核仁区。ThegeneralstructureofribosomesinprokaryotesandeukaryotesrNTs:numberofribonucleotidesThemacromolecularcompositionofamammalianribosomeStructureofT.thermophilus70Sribosomeasdetermi

6、nedbyx-raycrystallographySmallribosomalproteins,darkgray;Largeribosomalproteins,lightgrayLightmicrographofanisolatednucleusfromaXenopusootytestainedtorevealthehundredsofnucleoli.核仁纤维中心(FC)：位于核仁中央，低电子密度、染色浅，rRNA基因的储存位点。稠密区(DFC)：电子密度最高，由致密的纤维构成，一般见不到颗粒；

7、含正在转录的RNA分子。颗粒区(GC)：位于周边，直径为15-20nm的核糖核蛋白颗粒(RNP)-代表已合成的核糖体亚单位前体颗粒。Asectionofpartofanucleuswithanucleolus核仁(nucleolus)重要功能rRNA合成加工rRNA基因转录rRNA前体的加工核糖体大小亚单位各自的装配rRNA是核糖体的重要组成部分,而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的。