《荧光和荧光光谱》PPT课件

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1、Fluorescence&Spectroscopy荧光和荧光光谱良好的天平可测出10－5克的物质，微量化学分析可测出10－9克的物质，光谱分析可测出10－10克的物质，荧光分析可测出10－11～10－12克物质，一般的放射分则可测出10－18~10－19克的物质(请参见：任时仁编著“生物学中的放射必核技术”，北京大学出版社，1997：P173；潘中允主编“简明核医学”，北京医科大与中国协和医科大联合出版社，1990：P139)。因此，荧光分析法和放射分析法，尤其是后者，是目前最好的可用于对超微量物质进行高灵敏性测定的分析

2、方法。10-1810-16荧光光谱法特点灵敏度高、选择性强、用样少、方法简便以及能提供较多的物理参数等优点。用途广泛，如可用于研究溶液中蛋白质构象。ByFelixA.Carroll,PerspectivesonStructureandMechanismInOrganicchemistryBrooks/ColePublishingCompany,1998KASHARULEPolyatomicmolecularentitiesluminescewithappreciableyieldonlyfromthelowestexci

3、tedstateofagivenmultiplicity.Thereareexceptionstothisrule.KASHA-VAVILOVRULEThequantumyieldofluminescenceisindependentofthewavelengthofexcitingradiation.Thereareexceptionstothisrule.AnomalousFluorescencePatternsinCoralsWehavenoticedseveralkindsofanomalouspatternsi

4、ncoralsthatshowupclearlyinfluorescencebutarenotvisibleunderwhite-lightillumination.Theseinclude:brightordarkpatcheswithinareasofmoreuniformfluorescenceisolatedpatchesoffluorescentcolorcolorpatternsthatareonlyseeninfluorescenceThesignificanceoftheseeffectsiscomple

5、telyunknown,buttheyalmostcertainlypointtounderlyingdifferencesininternalchemistry.White-light(left)andfluorescence(right)photographsofacoral,Roatan,Honduras.Notetheyellow-fluorescentareainthephotographontherightthatisnotevidentintheotherimage.2。基本知识：（－〕.激发光谱与发射光谱

6、日立激发光光源--激发单色器-------比色杯--透射光

7、荧光

8、荧光单色器

9、探测器(计算机)荧光光度计示意图荧光熄灭剂：引起荧光熄灭的物质。如：卤素离子，重金属离子，硝基化合物，O2等。Protein:Fluorescence?在蛋白质中，能发射荧光的氨基酸残基，只有:Try(348nm),Tyr(303nm)和Phe(282nm)。个别蛋白质含有黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)，也能发射荧光。荧光光谱法是研究水溶液中蛋白质分子构象的一种新方法：通过测定蛋白质分子的自身荧光；另一是向蛋白质的特殊部位，引入荧光探测剂，然后测

10、定荧光探测剂的荧光。芳香族类(全部共三种氨基酸):向蛋白质分子引入荧光探测剂，运用荧光偏振法，可以测定：蛋白质分子的聚合与解离；抗原与抗体的反应机制；不同蛋白质分子相互作用等。氨基的修饰Lys:+NH3-CH(COO-)-C4H8-NH3+ForExample:NaBH4Cys:+NH3-CH(COO-)-CH2-SHCircadianRhythmsinRNaseA(Left,a:30C;b:37C)andDNA(Poly(dA*dT)-EB)(He,Y.J.etal.,MedicalHypotheses2000,5

11、5(3):253-256)Fluorescence(A.u.)Time(hr)inWashingtonDC,12:00(Noon)isstartingpointDNA:Fluorescence?NO.Inexperiment:DNA+EB=highFluo.Mechanism:Intercalation(嵌入)A-B