《疫学所有实验》PPT课件

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1、第二十一章免疫学检测原理免疫学检测乃借助免疫学、细胞生物学和分子生物学理论或技术，对抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子等进行定性或定量检测。免疫学检测技术在医学生物学研究领域得到广泛应用，并在临床实践中用于探讨免疫相关疾病的发病机制及其诊断、病情监测与疗效评价等。随着现代免疫学以及细胞生物学、分子生物学等相关学科的进展，免疫学检测技术不断发展和更新。第一节基于抗原-抗体反应的检测方法第二节免疫细胞的检测第三节免疫分子的检测学习指导1、掌握凝集反应和沉淀反应的概念2、掌握免疫细胞和免疫分子常用检测方法的名称3、熟悉三大标记技术的原理和方法

2、及其应用4、了解免疫学方法的研究概况、进展及在临床中的应用第一节基于抗原-抗体反应的检测方法一、抗原抗体结合反应的特点（熟悉）（一）特异性和交叉反应（二）抗原-抗体结合的带现象与可见性抗体反应中，可能出现抗原或抗体过剩的情况，由于过剩一方的结合价不能被完全占据，多呈游离的小分子复合物形式，或所形成的复合物易解离，不能被肉眼察见，此为前带现象（prozone）即抗体过剩，或后带现象(postzone)即抗原过剩。（三）可逆性抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。第一节二、抗原-抗体反应的影响因素（熟悉）（一）电解质（二）酸碱

3、度抗原抗体反应的最适pH是6~8。（三）温度抗体-抗原反应的最适温度为37℃。（四）抗原和抗体的性质抗体的特异性和亲和力是决定抗原-抗体反应的关键因素。抗原和抗体的浓度、比例对抗原-抗体反应的影响最大，是决定性因素第一节三、抗原抗体反应的基本检测方法（一）凝集反应（图21-1）（掌握）细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，此为凝集反应(agglutination)。1．直接凝集2．间接凝集3．间接凝集抑制试验各种凝集反应示意图第一节三、抗原抗体反应的基本检测方法（二）沉淀反应（掌握）可溶性抗原（血清蛋白

4、质、细胞裂解液或组织浸液、各种微生物蛋白分子等）与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的沉淀，此为沉淀反应(precipitation)。1．单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)2．双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)3．免疫电泳(immunoelectrophoresis)4．免疫比浊(immunonephelometry)单向免疫扩散(singleimmunodiffusion)双向免疫扩散(doubleimmunodiffusion)免疫电泳(immunoelectrophoresis)

5、对流免疫电泳火箭免疫电泳第一节三、抗原抗体反应的基本检测方法（三）补体参与的反应（了解）应用抗体与红细胞表面抗原结合，激活反应体系中的补体成分，根据溶血现象判定试验结果。补体结合试验和溶血空斑试验（后叙）均属此类反应。补体结合试验曾用于检测多种细菌、病毒的抗原或抗体，因易受多种试验条件影响，已渐被其他方法取代。此外，补体依赖的微量细胞毒实验曾用于HLA的血清学分型，方法是：将标准分型血清与待检淋巴细胞反应，再加入兔补体，若细胞表面表达相应HLA抗原，则被溶解。溶解细胞可被台盼蓝或伊红染料着色，而活细胞不着色，藉此判定结果。第一节三、抗原抗体

6、反应的基本检测方法（四）免疫标记技术（熟悉）免疫标记技术（immunolabellingtechnique）乃用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。。第一节三、抗原抗体反应的基本检测方法（四）免疫标记技术1．免疫荧光法(immunofluorescence，IF)此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原-抗体复合物散发荧光

7、，借此对抗原进行定性或定位。（1）直接荧光法：（2）间接荧光法：免疫荧光法(immunofluorescence，IF)第一节三、抗原抗体反应的基本检测方法（四）免疫标记技术2．酶免疫测定(enzymeimmunoassay，EIA)（1）酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)：是酶免疫测定中应用最广的技术，用于测定可溶性抗原或抗体。其基本方法是：将已知抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原-抗体反应在固相表面进行，借助洗涤将固相上的抗原-抗体复合物与液相中游离成分分

8、离（图21-6）。ELISA的操作方法很多，以下简介几种基本方法。第一节基本检测方法---（四）免疫标记技术1）双抗体夹心法：2）间接法：3)酶联免疫斑点试验(ELISPOT):