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《《疫学常用实验方法》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、CommonlyusedimmunologicalmethodsZhihaiQinInstituteofBiophysicsChineseAcademyofSciencesZhihai@ibp.ac.cnAg-Abreation:ELISA,Immunohistochemistry,FACS,Westernblot,Hybridoma&monoclonalantibodyCellfunction:proliferation3H－TdRMTTCFSECytotoxicity51CrAnimalexperiment非共价键
2、结合I.Antigen-AntibodyReaction抗体的互补决定区(CDRs)抗原决定簇(antigenicdeterminant)又称表位(epitope)非共价键结合CDR1CDR2CDR3CDR1CDR2CDR3CDR:ComplementarityDeterminingRegionFR:FrameworkRegionFR1CDR1FR2CDR2FR3CDR3FR4HLComplementarity-determiningregions(CDRs):AntigenicDeterminantSpecifici
3、ty特异性FeaturesofAg-AbReactionReversibility可逆性Ag+Ab→Ag·Ab解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。在一定条件下(如低pH、高浓度盐等)可以解离。Ratio最适比例Sensitivity敏感性化学比色法：mg/ml酶反应测定法：5-10μg/ml(免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿)标记的免疫测定法：ng/ml水平(例如，用放射免疫测定法或酶免疫测定法测定HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml)ELISA------酶联免疫吸附试验Immunohi
4、stochemistry--------免疫组织化学FACS------流式细胞术WesternBlotting-------免疫印迹技术Oftenusedmethods1.ELISA(酶联免疫吸附试验EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay)RIA(radioimmunoassay,Berson&Yalow，1960)IRMA(immunoradiovelricassay,Miles&Hiles,1968)E(L)I(S)A(Engvall&Perlmann,vanWeemenandSchuurs
5、,1971)Copyright©2005AmericanAssociationforClinicalChemistryLequin,R.M.ClinChem2005;51:2415-2418Estimatesofthenumberofarticlespublishedper5-yearperiodfrom1960to2005Figure.Estimatesofthenumberofarticlespublishedper5-yearperiodfrom1960to2005.ThesearchwasdoneinFebru
6、ary2005inPubMed/NationalLibraryofMedicine,NIH,withthesearchterms:enzyme-immunoassay,enzyme-linkedimmunosorbentassay(EIA/ELISAcombined),andRIA.(Ordinate),numberofarticlesinwhichthekeywordsarequoted.(Abscissa),5-yearperiodsfrom1960to2005. ,combinedEIA/ELISA; ,RIA.
7、[Note:Idonotpretendthatthenumbersinthisfigureareprecise;thetrends,however,areevident.]基础:抗原或抗体的固相化抗原或抗体的酶标记用途：目标蛋白的定性或定量分析三个必要试剂：（1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）;（2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；（3）酶反应的底物。ELISAa.包被b.抗原抗体反应c.酶促反应,显色d.终止显色，读取数据。ELISA基本的实验过程对照和标准
8、曲线阳性对照阴性对照定量测定：标准品制作标准曲线待测样品的合理稀释不同类型的检测方法2.Immunohistochemistry(免疫组化)原理：抗原抗体反应，抗体标记技术（荧光、酶）用途：组织或细胞内抗原的定性和定位流程：Copyright©2007AmericanAssociationforCancerResearchZhao
