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《GBT 16286-1996 食品中蔗糖的测定方法 酶-比色法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T16286-1996前言食品中蔗糖的测定方法，一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中，还有其他糖类被水解为还原糖，导致测定结果偏高。本标准采用的酶一比色法是在检索了近20年148篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(R-果糖昔酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖)，灵敏度高，操作简便，因此测定结果准确。蔗糖酶解后的产物—葡萄塘的测定方法，与GB/T16285-1996保持一致。本标准的附录A是标准的附录。本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位:
2、中国农垦北方食品监测中心。本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核。本标准主要起草人:张宗城、刘宁、郝I中华人民共和国国家标准食品中蔗糖的测定方法Gs/T16286一1996酶一比色法Methodfordetermin.tionofsucroseinfood-Enzyme-colorimetrkmethod1范围本标准规定了用酶一比色法测定食品中蔗糖的方法。本标准适用于各类食品中蔗糖的测定。本标准最低检出限量为。04Kg(蔗糖/mL(试液)。2原理在件果糖昔酶(各FS)催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡
3、萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化各D-葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D-葡萄糖酸-s-内酷和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色酿亚胺。在波长505nm处测定酿亚胺的吸光度，计算食品中蔗糖的含量。C,2H22011+H20士月三C,H,206(G)+C6H,A(F)cCo,H,:A0。(G)+0O。Z-t塑址,H,o06+1-1202H202+C,H,OH+C=H=N,O坚聚c6H,NO+H203试剂31组合试剂盒1号瓶:内含详果糖普酶(fructosida
4、se)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠;2号瓶:内含。2mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.6)200mL，其中含4-A基安替比林0.00154mol/L;3号瓶:内含。.022mol/L苯酚溶液200ml.;4号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)S00U(活力单位)、过氧化物酶(辣根，peroxidase)2000U活力单位)。1,2,3,4号瓶须在4℃左右保存。3.2酶试剂溶液3.2.1将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解。此溶液即
5、为卜果糖普酶试剂，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol,/L,PH=4.6。在4℃左右保存，有效川期一个月。3.2将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻播动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解，即为葡萄糖氧化酶一过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存.有效期一个月。国家技术监督局1996一04-10批准199&一12一01实施GB/T16286一19963.3。·085mol/1亚铁氰化钾溶液称取3.7g亚铁氰化钾仁K,Fe(CN)fi·311,O,GB1273.分析纯〕，溶于1
6、00m工重蒸馏水中，摇匀3.4。·25mot/L硫酸锌溶液称取7.7g硫酸锌(ZnSO,·7H,O,GB666，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀3.50.1mol/l.氢氧化钠溶液称取0.4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。3.6蔗糖标准溶液称取经10。士2'C烘烤2h的蔗塘(HG3-1001，分析纯)0.4000g,溶于重蒸馏水中，定容至100ml，摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释vio.oo-"vtoo，即为400kg/mL蔗糖标准溶液。4仪器和设备实验室常规仪器及下列各
7、项:41研钵或粉碎机。车2分析筛。4.3组织捣碎机。4.4恒温水浴锅。4.5叮见光分光光度计4.6微量移液管;1.00ml，精度。.01m工。5试样的制备5.1固体样品粉末状样品:取有代表性的样品至少2009，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。颗粒状样品:取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100目分析筛，爱于密闭的玻璃容器内。新鲜水果、蔬菜等固体样品:取有代表性的可食部分至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内5‘2糊状样品取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的
8、玻璃容器内53固液体样品取有代表性的样品至少2009，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。5.4液体样品取有代表性的样品至少2009，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内6试液的制备6门不含蛋白质的试样用100ml烧杯称取试样(5.1一5.4)0.5一10g(精确至0.0001g)，加少量重蒸馏水，转移到250ml,容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度。摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初的滤液30
