第15章 厌氧菌

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1、第十五章厌氧菌郑州大学第一临床学院冯羡菊第一节概述厌氧性细菌(anaerobicbacteria)指一群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长繁殖的细菌。厌氧菌的分类分为两类：一类为有芽胞厌氧菌，只有一个属，即梭菌属，共有130个种，以芽胞形式存于体外。另一类为无芽胞厌氧菌，包括40多个属，300多个菌种和亚种；多为体内正常菌群，存在于皮肤、口腔、上呼吸道、肠道和泌尿生殖道。易引起这些部位的内源性感染。厌氧菌感染的条件局部组织的氧化还原电势降低：如血管损伤、烧伤、动脉硬化、肿瘤压迫、组织坏死等，可造成局部组织的缺血、缺氧等。皮肤黏膜屏障被破坏：如大面积外伤伴有需氧菌感染，为厌

2、氧菌感染提供了条件。机体免疫功能下降：如接受免疫抑制剂、放疗或化疗的患者；糖尿病、慢性肝、肾疾病及老人、婴幼儿、早产儿等。菌群失调：长期或大量应用广谱抗菌药物无效的患者，均可诱发厌氧菌感染。厌氧菌感染的临床特征局部有气体产生为重要指征之一发生在黏膜附近的感染深部外伤如枪伤、人或动物咬伤后的继发感染分泌物有恶臭或暗红血色或在紫外光下发出红色荧光，或脓汁中有硫磺颗粒即为放线菌感染某些抗生素治疗无效的感染革兰染色着色不均、形态奇特、呈明显多形性；或镜检见细菌而需氧培养为阴性者。第二节厌氧菌的检验标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。临床在进行厌氧菌培养前应与实验室联系，以

3、便实验室做好接种培养的准备。须注意两点：①标本不能被正常菌群所污染；②应尽量避免接触空气。某些标本不适合做厌氧菌培养：如鼻咽拭子、痰液、流出的脓液、阴道分泌物、粪便等。标本的检查方法实验室收到标本应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应将标本保存于室温（冷藏对厌氧菌有害）。直接检查：实验室收到标本应仔细观察其性状，包括气味、是否脓性、带血或黑色坏死组织、硫磺样颗粒及紫外灯下有无荧光等。除血液外，各种标本均须直接涂片作革兰染色镜检，发现染色不均，形态奇特者常为厌氧菌的表现。菌名　革兰染色　　　形态及其他特征脆弱类杆菌G－两端钝圆着色深，中间色浅不均匀，有空泡，

4、长短不一，标本有琥珀味产黑色素普雷沃菌G－球杆菌，可见多形性，长短不一，紫外线照射发红色荧光，标本有恶臭具核酸杆菌G－菌体细长，两头尖，紫色颗粒沿菌体长轴成双排列，标本有丁酸味坏死梭杆菌G－菌体细长，高度多形性，长短不一，菌体中部膨胀呈圆球形韦荣球菌G－极小的革兰阴性球菌消化链球菌G＋球形或卵圆形，呈链状的小球菌，易染成阴性乳酸杆菌G＋细长无芽胞，有时多形性，标本有乳酸气味痤疮丙酸杆菌G＋排列呈X、Y、V或栅状，标本有丙酸气味放线菌G＋分枝呈棒状，X、Y、V或栅状排列，脓汁中的黄色颗粒呈琥珀酸气味破伤风梭菌G＋细长鼓槌状，极端芽胞，圆形产气荚膜梭菌G＋粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，

5、有荚膜艰难梭菌G＋粗长杆菌，芽胞卵圆形或长方形，位于次极端厌氧菌的初步鉴定标本的分离培养初代培养：厌氧菌的初代培养比较困难，不仅要创造无氧环境，还要选择适当的培养基。在培养基选择上应注意：1.尽量使用新鲜培养基，2～4ｈ内用完；2.使用前放入无氧环境，预还原处理24～48ｈ；3.也可采用预还原灭菌法制备的培养基；4.液体培养基应煮沸10min，驱除溶解氧，并迅速冷却，立即接种。培养基的选择根据镜检结果选择合适的培养基，常用的有非选择性和选择性培养基两种。非选择培养基：以牛心脑浸液及布氏肉汤为基础，补充0.5%酵母浸出液，5μg/ml氯化血红素、10μg/ml维生素K1及5%~10%的

6、脱纤维血的强化血平板。几乎能培养出所有的厌氧菌。培养基的选择常用的选择培养基:1.七叶苷胆汁平板（BBE）用于脆脆弱类杆菌2.卡那万古冻溶血平板（KVLB）可抑制大多数兼性厌氧菌，使产黑色素普雷沃菌早期产生黑色素3.FS培养基梭杆菌选择培养基4.VS培养基韦荣球菌选择培养基5.CCFA培养基艰难梭菌选择培养基6.卵黄平板（EYA）和兔血平板产气荚膜梭菌标本的接种初代培养应同时接种固体、液体两种培养基，且每份标本应同时接种3个平板，分别置有氧、无氧和含5~10%CO2环境培养。为了便于在混合培养物中发现厌氧菌，一般将标本分3区划线接种于平板上，在1、2区交界处，贴一张含5μg/片的甲硝

7、唑纸片，如纸片周围出现抑菌圈，表明有厌氧菌存在。培养方法通过物理、化学或生物学等方法，创造一种无氧的环境常用的厌氧培养法：1.厌氧罐法2.气袋法3.厌氧手套箱4.厌氧工作站结果观察厌氧菌的初代培养生长较慢，故应在48ｈ后才能初步观察观察时应注意：1.厌氧菌在对数生长期对氧非常敏感，故在培养的48ｈ内不应使细菌暴露于空气中2.标本镜检阳性，但培养48ｈ却无菌生长，应继续培养5～7ｄ。次代培养和厌氧菌的确定初代厌氧培养有细菌生长时，必须做耐氧试验以确定是否为厌