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时间:2019-05-26
《第十節實驗動物模式第十一節灌流實驗設計》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第十節實驗動物模式本實驗室所使用之高果糖飼料餵食誘發高血壓之動物模式為Reaven在1980所提出的餵食誘發高血壓模型(27)。用富含果糖成分之飼料長期餵食一般正常的SD大白鼠,發現老鼠會有高三酸甘油酯血症、高胰島素血症、胰島素阻抗和高血壓的情況,為研究臨床上“SyndromeX”一個極為有用的動物模式,其造成動物體內胰島素阻抗與高血壓的機轉尚不十分明瞭。推測果糖餵食造成上述情況的原因可能為果糖本身會促進肝臟合成三酸甘油酯因此造成高三酸甘油酯血症(87),而三酸甘油酯一方面會刺激胰島素的分泌使血中胰島素濃度升高;另一方面,血中的高三酸甘油酯造成血
2、中游離脂肪酸升高,抑制了糖酵解作用(glycolysis)(28),使得血中葡萄糖濃度持續升高,使胰島素促進的葡萄糖攝入減少,造成胰島素阻抗,而使得胰島素持續分泌造成血中胰島素濃度升高(27)。第十一節灌流實驗設計壹、大白鼠在插管手術後48小時以上的恢復期後開始進行灌流實驗,將左側股動脈插管接到測量血壓的壓力轉換器,當大白鼠習慣於實驗環境後(約30到60分鐘),記錄第一次血壓,而由連接股動脈的插管採取血液樣本,時間定為“-30分”。而灌流開始的時間設為“0分”而分別在灌流後30、60、90、120、150、180、210分鐘記錄其血壓、心跳值及採
3、取血液樣本測血中生化值。而以第0分鐘的值為Control值;以第60、90、120分鐘三個時間點的平均變化值為Phase32I的值;以第150、180、210分鐘三個時間點的平均值為PhaseII的值。貳、灌流實驗以正常血糖及升血糖素濃度箝制術(euglycemicandeu-glucagonemicclampingtechnique)的技術來進行。參、實驗分成四大部分:第一部分:排除高胰島素血症的因素外,血中三酸甘油酯濃度升高對正常鼠與果糖餵食鼠的血壓之影響。第二部分:在箝制高胰島素血症及正常血糖濃度的情況下,血中三酸甘油酯濃度升高對正常血壓鼠
4、及果糖餵食鼠的血壓之影響。第三部分:在沒有胰島素阻抗情況下,高胰島素血症和/或高三酸甘油酯血症對正常鼠血壓的影響。第四部分:在胰島素阻抗的情況下,高胰島素血症和/或高三酸甘油酯血症對果糖餵食鼠血壓的影響。肆、而實驗各組依不同需要,另外加灌不同的溶液:a.組Ca和組Fa:自0時起,加灌注射用水(waterforinjection,0.2-1-1ml.kg.min),和胰島素溶液(protaminezincinsulin溶於生理食-1-1鹽水與血漿的混合液,4mU.kg.min)。b.組Cb和Fb:自0時加灌三酸甘油脂乳狀液(MCT/LCT,1.2-
5、1-1ml.kg.min,20%triglycerideemulsion)。-1-1c.組Cc和組Fc:自0時起,灌流三酸甘油脂乳狀液(1.2ml.kg.min,3320%triglycerideemulsion)和胰島素溶液(protaminezincinsulin-1-1溶於生理食鹽水與血漿的混合液,4mU.kg.min)。d.組Cd和組Fd:自0時起,加灌注射用水(waterforinjection,0.2-1-1ml.kg.min)。伍、從60分鐘起,每隔30分鐘測量一次血壓並從股動脈採取血液樣本,以檢測血中所需生化值;而每隔15分鐘測量
6、血液之葡萄糖濃度,使其維持在穩定狀態。在120分鐘時,停止三酸甘油酯或注射用水的灌流,再觀察90分鐘。34
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