资源描述:
《一种快速提取葱属植物DNA的方法》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物技术通讯860LETTERSINBIOTECHNOLOGYVol.23No.6Nov.,2012doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2012.06.022技术方法一种快速提取葱属植物DNA的方法1,2112王婵,田保华,裴雁曦,王永勤1.山西大学生命科学学院,山西太原030006;2.北京市农林科学院蔬菜研究中心,北京100097[摘要]目的:针对分子育种工作的繁琐性及葱属植物次生代谢物较多的特点,研究一种利用普通试剂及简单仪器高效快速提取葱属植物DNA的方法。方法:对碱处理法稍加改进,在碱
2、性环境中高温裂解细胞,将释放的DNA保存在Tris缓冲液中,用PCR检测提取质量并分析DNA的保存时间。结果:与用试剂盒提取的DNA相比,扩增产物无显著差异,利用此方法提取DNA并分析了13个洋葱品种的细胞质雄性不育类型;保存时间分析显示,DNA在常温下只能保存5d,在4℃或-20℃可至少保存2个月。结论:该方法方便快速、成本低、适于田间操作,得到的DNA可满足分子生物学实验的基本要求,可用于以PCR为基础的分子标记辅助育种。[关键词]DNA提取;碱处理法;保存时间;葱属[中图分类号]Q94-336;Q78[文献标识
3、码]A[文章编号]1009-0002(2012)06-0860-03ARapidMethodforExtractingDNAinAllium1,2112WANGChan,TIANBao-Hua,PEIYan-Xi*,WANGYong-Qin*1.CollegeofLifeScience,ShanxiUniversity,Taiyuan030006;2.BeijingVegetableResearchCenter,BeijingAcad⁃emyofAgricultureandForestrySciences,Beiji
4、ng100097;China*Co-correspondingauthors,WANGYong-Qin,E-mail:wyqty@sohu.com;PEIYan-Xi,E-mail:peiyanxi@sxu.edu.cn[Abstract]Objective:BecausebreedingistediousandAlliumhavemanysecondarymetabolites,wedescribedarapidmethodusingcommonreagentsandsimpleapparatusforextrac
5、tingDNAinAllium.Methods:Thealkalitreatmentwasimproved.TheplantcellswerecrackedinthehightemperaturewhenexistNaOH,thenthere⁃leasedDNAwerestoredinTrisbuffer.ThequalityandstorageperiodofDNAwerestudiedbyPCR.Results:ComparedwithDNAextractedbykit,theiramplificationpro
6、ducthavenosignificantdifference.UsingthismethodtheDNAwereextractedandthestylesofcytoplasmwereidentifiedof13onionvarieties.AnalysisofthetimeofstorageshowedthatDNAcanbekeptfor5daysatroomtemperature,atleasttwomonthsat4℃or-20℃.Con⁃clusion:Thisrapidmethodisconvenien
7、tandfast.Also,ithasthelowcostandissuitableforfieldoperation.TheextractedDNAcanbeusedforthemolecularmarker-assistedbreedingbasedonPCR.[Keywords]DNAextraction;alkalitreatment;timeofstorage;Allium快速提取DNA是作物分子育种发展的前提,无缩短了提取时间,且提取的DNA也能满足分子生物论是对植物遗传多样与亲缘关系的研究、种质资源学研
8、究的需求,但这些方法在葱属中还未见相关应与种子纯度的鉴定,还是相关基因的定位与克隆,都用报道。需要大批量地提取DNA。目前植物DNA提取最常葱属(Allium)植物含有丰富的含硫化合物、黄[6-7]用的方法有CTAB法、SDS法、果胶酶法、高盐低pH酮类化合物及多糖等,具有多种生理功能,如抑菌值法,虽然这些方法都已成熟,但均步骤繁多、费时消炎、