GB4789.3-1994 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定.pdf

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1、GB4789.3—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定MicrobiologiclexaminationoffoodhygieneDetectionofColiformbacteriaGB4789.3—19941主题内容与适用范围本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于食品中大肠菌群的测定。2术语大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL（

2、g）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。3引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4设备和材料4．1温箱：36±1℃。4．2冰箱：0～4℃。4．3恒温水浴：44±0.5℃。4．4天平。4．5显微镜。4．6均质器或乳钵。4．7平皿：直径为90mm。4．8试管。4．9吸管。4．10广口瓶或三角烧瓶：容量为500mL。4．11玻璃珠：直径约5mm。4．12载玻片。4．13酒精灯。4．14试管架。5培养基和试剂5．1乳糖胆盐发酵管：按GB4789.28中4.9规定。5．2伊红美蓝琼脂平板：按GB4789.28中4.25规

3、定。5．3乳糖发酵管：按GB4789.28中4.10规定。5．4EC肉汤：按GB4789.28中4.11规定。5．5磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789.28中3.22规定。5．6生理盐水。5．7革兰氏染色液：按GB4789.28中2.2规定。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施.www.bzxzk.com.GB4789.3—19946检验程序大肠菌群检验程序如下：7操作步骤7．1检样稀释7．1．1以无菌操作将检样25mL（或g）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠）

4、或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000～10000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。7．2．2用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。7．1．3另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。7．1．4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。7．2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量

5、在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下残程序进行。7．3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。7．4证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵和，置36±1℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞

6、杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。7．5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPN值。8粪大肠菌群（faecalcoliform）8．1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见7.2条）转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2℃水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24±2h，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养18～24h，凡平板上有典型菌落乾，则证实为粪大肠菌群阳性。中华人民共和国卫生

7、部1994—03—18批准1994—09—01实施.www.bzxzk.com.GB4789.3—19948．2结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。大肠菌群最可能数（MPN检索表）阳性管数95%可信限MPN0.11mL(g)×30.01mL(g)×3100mL(g)下限上限mL(g)×3000＜3000130＜590002600039001030＜513001160012900131200206002190022120023160030900311300321600331901

8、0040＜520010170102101021101031501107010230111110303601121501131901201103036012115012220012