牛病毒性腹泻与粘膜病

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1、牛病毒性腹泻与黏膜病牛病毒性腹泻，又称牛病毒性腹泻/粘膜病，是由BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反刍动物及猪的一种重要传染病。临床主要表现为发热、粘膜糜烂、溃疡、白细胞减少、持续感染、咳嗽及怀孕母牛流产或产生畸形胎儿。同一种病原引起的多种病状的传染病我国1980年李佑民首从国外进口奶牛分离出BVDV；上世纪90年代郑志刚等在全国范围内调查，BVDV平均阳性率为19.56%，近年来本病在国内阳性检出率呈逐年上涨的趋势。本病给养牛业造成明显损失（产乳↓、重↓、流产等）。牛病毒性腹泻1BVDV的流行病学2BVDV的病原学3BVDV的基因结构及其蛋白4BVDV的研究进展内容摘要56BVDV

2、的防治BVDV的主要诊断方法BVDV的流行病学传染源：病牛和带毒牛是主要传染源。传播途径：主要通过消化道和呼吸道传播；直接或间接接触也可以传播；吸血昆虫也是重要的传播媒介。易感动物：主要感染牛（肉牛、奶牛），也可感染猪。本病多发于寒冷季节，过分拥挤可促进本病发生。BVDV的病原学属黄病毒科、瘟病毒属有囊膜，直径25-30nm，正链RNA胎牛肾、睾丸、猪肾、胎羊睾丸可增殖传代BVDV。BVDV可以分成致细胞病变型（CP）和非致细胞病变型（NCP）。BVDV的基因结构及其蛋白5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1(gp25)-E2(gp53)-P7-NS2-3(P12

3、5)-NS4A(P10)-NS4B(P30)-NS5A(P58)-NS5B(P75)-3',其中C，ERNS，E1，E2是病毒的结构蛋白。其余为非结构蛋白。BVDV的主要基因、蛋白研究进展ADDYOURTITLE核衣壳组成成分，具有免疫原性BVDV基因组具有较高的保守性瘟病毒属内高度保守，在病毒复制、病毒RNA转译或者病毒多聚蛋白加工过程中具有重要作用5‘-UTRCNS3ERNS内有一高度保守结构域，可用于研究亚单位疫苗，也可作为基因工程诊断抗原E2与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别、吸附的主要部位Npro具有自体蛋白酶活性，有较高的保守，可以对瘟病毒进行种、群或型的鉴定

4、5'-UTR：5'末端无甲基化的“帽子”结构，5'-UTR序列在BVDV的各毒株间有较高的保守性，因此常根据5'-UTR的序列设计引物来检测BVDV或对BVDV进行分型。5'-UTR在病毒转录、翻译过程中起重要的作用。2010年张兴娟等分别用5'-UTR设计一对引物，预扩增片段125bp；2010年孟雨等人也利用5'-UTR设计一对引物，预扩增片段218bp，实验证明利用5'-UTR设计引物具有很好的特异性和敏感性。E2：是BVDV的主要保护性抗原，能诱导机体产生中和抗体，所以新型疫苗都是针对E2结构蛋白的。也是与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别、吸附的主要部位，E2基因

5、一直是国内外学者研究瘟病毒的重点。E2是形成BVD基因工程疫苗的最好的选择。BVDVE2DNA疫苗是近年来BVDV免疫研究的热点。如2007吴明福等构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-E2并免疫小鼠，可诱导小鼠产生一定程度的体液和细胞免疫应答。NS-3：NS3区域与病毒的毒力，生长特性有关。NS3在瘟病毒属内高度保守，在病毒复制、病毒RNA转译或者病毒多聚蛋白加工过程中具有重要作用。NS3的表达与宿主细胞CPE的产生有密切关系。2009年魏伟等用BVDVNS3蛋白中有免疫反应性的重组片段作为包被抗原，建立了一个BVDV抗体检测的间接ELISA方法。血清学诊断免疫学诊断诊断方法的进展分子生

6、物学诊断123血清学诊断常见的方法为主要包括血清中和试验和琼脂扩散试验两种。琼脂扩散试验准确性较低，检出的结果常常有假阳性。血清中和试验重复性高，准确性好，已作为BVDV诊断的“金标准”，但血清中和试验在基层使用时，常遇到费时、费力，需要细胞培养等试验室技术问题，无法得到推广。免疫学诊断酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫荧光技术（IFA）免疫过氧化物酶技术（IP）免疫荧光技术（IFA）免疫荧光技术（IFA）又称荧光抗体技术，可用于检测细胞培养物以及病变组织的冰冻切片中BVDV感染情况。免疫荧光抗体技术特异、敏感、快速，但它需要荧光显微镜，使得此技术无法得到推广应用。ELISAELISA常被用

7、于检测组织器官培养物中BVDV，监测牛群中BVD抗体水平，评估潜伏感染情况。其中最常用的是双抗夹心ELISA和间接ELISA，也有使用BVDV单克隆抗体与ELISA联合诊断BVD。研究较多的IBRV诊断蛋白有NS3，E2蛋白酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫过氧化物酶技术（IP）诊断BVDV准确、可靠，可用于了解BVD的总体分布情况。链酶亲和素-生物素过氧化物酶检测方法，可以用来检测福尔马林固定、石蜡包埋组织