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1、Endoglin结合肽功能性亲和常数的测定作者：毕仙民,梁志清,侍立峰单位：第三军医大学西南医院妇产科,重庆400038 提 要:目的 测定人源Endoglin结合肽的亲和常数。方法 采用非竞争性ELISA固相法,经戊二醛偶连法包被多肽,确定最佳多肽包被浓度、最佳多肽包被时间及最佳多肽与Endoglin结合反应时间后,得到了结合肽及抗EndoglinIgG与Endoglin的抗原抗体结合反应曲线,计算出结合肽及抗EndoglinIgG与Endoglin的亲和常数。结果 结合肽及抗Endog-linIgG的功能性亲和常数分别为(2.956&
2、plusmn;0.749)×106mol/L和(7.403±10.76)×108mol/L。结论 该结合肽与Endoglin的结合能力较强。 关键词:酶联免疫吸附测定;rhEndoglin;结合肽;抗体亲和力 中图法分类号:Q503;Q516文献标识码:ADeterminationoffunctionalaffinityofrhEndoglinconjugatedeptideBIXian-min,LIANGZhi-qing,SHILi-feng(DepartmentofGynaecologyandO
3、bstetrics,SouthwestHospita,lThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China) Abstract:Objective ToassessfunctionalaffinityofrhEndoglinconjugatedeptideinordertoidentifytheaffinity.Methods WemeasuredthefunctionalaffinityofrhEndoglinconjugatedeptidewithnon-competitiveEL
4、ISAmethod.AftercoatingthepeptidebyBSAbindingwithglutaralcouple,affirmingthebestconcentration,besttimeofpeptidetocoattheplateandthecoatingcoefficien,tandtheproperbindingtimeofpeptidetoEn-doglintoreachanequilibrium,weplottedthestandardcurveofthebindingreactionofpeptideandEnd
5、oglin.Results Theaffinityconstantofpeptideandanti-hEndoglinIgGisrespectively(2.956±0.749)×106mol/Land(7.403±10.76)×108mol/L.Conclusion ThepeptidewegotfromthepeptideliberarycanstronglybindtoEndoglin,providingatheoreticalbasisforitsclinicaluse. Key
6、words:enzyme-linkedimmunosorbentassay;rhEndoglin;conjugatedeptide;antibodyaffinity Endoglin又名CD105,是内皮细胞表面与增殖相关的膜抗原,在正常组织中不表达,在有活性血管生成区域及肿瘤组织中特异性高表达[1],与肿瘤进展密切相关,是卵巢癌等恶性肿瘤早期诊断和治疗的理想的分子靶位[2,3]。噬菌体随机肽库技术是将大量的随机肽段以融合形式表达在噬菌体的表面,使用模拟多肽的思想,在对筛选的配体或受体的结构和功能了解甚少的情况下获得其模拟多肽,可作为一个
7、良好的靶向载体[4,5];这种导向治疗是一种重要的抗肿瘤治疗手段,其关键是短肽与靶分子的结合特性。为此我们对噬菌体随机十二肽库技术进行筛选,在获得与rhEn-doglin胞外区特异性结合的12肽的基础上,对结合肽的亲和活性进行测定,为进一步研究靶向治疗奠定基础。1 材料与方法1.1 材料 十二肽(AHKHVHHVPVRL)由上海基因生物工程有限公司合成,纯度>95%;rhEndoglin蛋白、anti-hEndoglinIgG、Bioti-nylatedanti-hEndoglinIgG、SubstrateReagentpack、s
8、treptavidin-HRP、StopSolution均购于R&D公司;PBSN包板液、WashBuffer(0.05%PBST,pH7.4)、Diluent(1%BS
