核因子κB在TNFα诱导宫颈癌细胞凋亡过程中作用的研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．论文作者签名：i!三量：日期：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产

2、权单位属中国医科大学．本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：。ii垒圣指导教师签名：i乙：b．乏核因子KB在TNF—oc诱导宫颈癌细胞凋亡过程中作用的研究目的宫颈癌是一种恶性度极高的常见肿瘤，目前宫颈癌的治疗除手术和放疗外，化疗也普遍应用。化疗药物一般通过多种途径诱导宫颈癌细胞发生凋

3、亡，达到消灭肿瘤细胞的目的。诱导肿瘤细胞凋亡是化疗药物抗肿瘤的主要机理所在，而凋亡受阻是肿瘤对化疗产生耐药的主要原因之一。细胞凋亡是受一系列基因调控的复杂过程，近来一些学者发现NF—r,B活化在抵抗细胞凋亡中起重要作用。目前有研究发现多种化疗药物在杀伤肿瘤细胞同时能够诱导核转录因子NF—kB活化。目前已经证明核因子KB(NF—KB)是一种细胞保护性因子，可上调“保护性或抗凋亡蛋白”，在肿瘤发生过程中可提高肿瘤细胞生存率，抑制细胞凋亡，使肿瘤细胞产生耐药。在临床上宫颈癌患者在化疗过程中对化疗药物诱导的凋亡产生拮抗，除了已知的各种耐药因素外，是否与NF

4、一．cB活化也存在～定的关系，目前尚无明确的结论。本研究探讨干扰索1(IFN一1)对肿瘤坏死因子d(，rNF—d)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF—o【诱导NF—KB活化的影响，旨在探讨宫颈癌Hela细胞早期耐药的原因。方法宫颈癌HeN细胞系由中国医科大学细胞生物学教研室提供，常规培养传代。取指数生长期的细胞以3×105／ml，接种于96孔培养板中，培养2小时后，细胞贴壁，分为空白对照组(不加TNF—n)和实验组(加TNF—d，购自美国R＆D公司)终浓度分别为(5，ag／ml，10he,／ml，15ng／m1)作用不同时间分为6，12，24h，每

5、组设三个复孔。指数生长期的细胞以3x105／ml与干扰素1(终浓度100u／m1)共培养2h，再加入终度与上述相同的TNF—d继续培养3h，设三个复孔。分别用于进行、MTr检测，细胞爬片和提取蛋白，备免疫组化Tunel检测和westernblot测定。结果在TNF一仅诱导下，NF—kB由细胞浆转移至细胞核。100Iu／ml的IFN一1能显著抑制TNF—a诱导的Hela中NF—kB的活化，NF—kB活化抑制率为45．O％。10ng／rnlTNF—d作用24小时能明显诱导Hela细胞凋亡，100Iu／ml的IFN一1能显著增强TNF一0l诱导的Hela

6、细胞凋亡，凋亡增加率为50．2％。结论TNF—d诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时激活NF—kB；IFN一1可通过抑制NF—kB活化，增强TNF—Ct诱导Hela细胞凋亡的作用。这一结果预示采用高特异性NF—kB抑制剂，结合使用化疗药物，可以有效提高肿瘤患者的化疗效果，为肿瘤治疗提出一条新思路。关键词宫颈癌；肿瘤坏死因子；核因子一KB·2·StudyabouttheroleofNF—-kBintheprocessofcervicalcarcinomacellapoptosisinducedbyTNF--OLCervicalcarcinomaisone

7、oftIlemostmalignanthumancancerforwoman．ChemotherapyisakindoftreatmentthatVaneffectivelytreatcancerexceptoper．ationandradiotherapy．tumor—killingdrugkilltumorcellmainlythroughapop．tosis．Apoptosisisaprocessofselfdestructionthatrequirestheactivationofageneticprogrammethatmayleadto

8、changesincellmorphology，DNAfragmenta-tion，andproteincrosslink