细菌转录调控因子NusA和GreA蛋白的分子伴侣活性研究

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1、．r．．．．e．．．．g．．．．u—．．1．．a．．tionfactorsNusAandGreAByKunLiADissertationSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofPhilosophyInstituteofMicrobiology,ChineseAcademyofScienceNovember,2012目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1缩略表⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第一章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．什么是分子伴侣⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．92．分子伴侣的功能机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯103．分子伴侣的种类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114．未知分子伴侣蛋白的存在和预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22第二章EcoliNusA蛋白高温下的聚合⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．271．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、28Ⅲ0Ⅲ7洲6ⅢⅢⅢⅢ●I删8洲3㈣2删YII⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯281．3nusA全长基因。nusA(1-．417)4WnusA(1-343)基西片段的克睦⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，301．4NusA蛋白、NusA(1-417)、NusA(1-343)蛋白的表达和纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯341．5NusA蛋白及其c．末端缺失蛋白高温诱导静结梅变弛⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯362．结果和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．392．3G末端缺失突变体Nu诅(1417、、NusA(1-343)蛋白的克囊、

4、表达和纯他⋯⋯⋯503．本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．56第三章EcoliNusA蛋白的分子伴侣活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．571．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯581．3DnaK基因的竞蠹和DnaK蛋白表达蕾株的黼⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯582．结果和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66662．2NusA期均’鬻霉7cDrr诱导廓质．赢黄凝黟⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯醐2．6高温万NusA蛋自在体内状态下的分子伴侣

5、功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．772．9c．末端区域对NnsA蛋白分子伴侣活性起关键作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、．823．本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯83第四章NusA蛋白聚合现象与分子伴侣活性的普遍性⋯⋯⋯⋯⋯．851．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯86861．3只aeruginosa，只putida，厶bulgaricus、晟coagulans、尼erythropolis黼NusA．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．+．．．．．．

7、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．872．结果和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90IIIIV3．本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．108第五章GreA蛋白的分子伴侣活性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1091．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1101．3greA基因的克睦及t组曩粒和表达菌株的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lH2结果和讨论

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．117120．．．．．．．．．．．．．．．．1363本章小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．138参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．143研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．155简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯156VVI致谢首先衷心感谢马延和老师和许平老师。马老师和许老师是我科研道路上的引路人。六年多以来，在两位老师的悉心引导下，我从一个基础比较差、没有实验室经验的本科生，开始接受正规的、多方面的科研训练，逐渐

9、走上科研之路的正轨。老师对科研事业十年如一日的执着与热情，对工作严谨认真、一丝不苟的态度，一直在感染着我，也为我和实验室所有的老师同学树立了学习的表率。在老师们严格的要求和督促下，我才能改正以