Survivin在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性

《Survivin在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、河北医科大学硕士学位论文Survivin在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性姓名：董耀申请学位级别：硕士专业：耳鼻咽喉科学指导教师：胡俊兰2003.3.1中文摘要Survivin在喉癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性摘要目的：喉癌是耳鼻咽喉一头颈外科的常见恶性肿瘤，严重威胁人类的健康。随着现代分子生物学的发展，已证实喉癌的发生发展与多种癌基因的过度表达及抑癌基因的失活有关。细胞凋亡是机体清除不需要的和／或异常细胞的一种方式，对于肿瘤来说是机体的一种自我保护。而凋亡抑制可以破坏机体清除异常畸变细胞的机制，促

2、成肿瘤的发生发展。多种癌基因也是通过凋亡抑制而促进细胞癌变。新近发现的凋亡抑制蛋白(IAP)survivin具有分子量小、结构独特、抗凋亡能力强等特性。Survivin广泛表达于多种恶性肿瘤组织而在正常成人终末分化组织中无表达，并以细胞周期依赖性表达于G2／M期参与调节细胞周期，克服G2府“检查点抑制细胞凋亡。另外，由于survivin特异性表达于肿瘤组织，使其成为候选癌基因，并成为肿瘤基因治疗的新靶点。本实验采用RT-PCR及流式细胞术(FCM)，从mRNA及蛋白水平探讨survivin与喉癌发生发展的关系，

3、并分析survivin在喉癌细胞凋亡中的作用，试从分子生物学角度探讨喉癌的发病机制并明确survivin在喉癌防治中的价值。方法：全部标本取自河北医科大学第四医院耳鼻喉一中文摘要头颈外科2001年10月至2002年12月42例住院喉癌患者的手术切除喉癌组织及癌旁组织(距肿瘤边缘>0．5em)，所有肿瘤组织均经病理学确诊均为鳞状细胞癌，癌旁组织均经病理证实为炎症或正常粘膜。全部病例术前均未行放、化疗，临床病例资料完整。分子生物学标本(全部42例)取材后均立即置液氮骤冻，保存于．70℃冰箱。流式细胞术标本(其中40

4、例)取材后用70％酒精固定，4℃保存。Survivin引物序列为：正义引物5’一GCATGGGTGCCCCGACGTTG一3’反义引物5’一GCTCCGGCCAGAGGCCTCAA一3’IU—PCR方法：运用Trizol法提取RNA，鉴定RNA的完整性和纯度之后进行RT—PCR。反应条件为：逆转录37℃60分钟，94℃5分钟；PCR94℃30秒，63℃1分钟，72℃1分钟共35个循环；最终延伸72℃5分钟。PCR产物447bp，以B．actin838bp为内参照。结果判定：49lPCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳后

5、，通过凝胶成像仪进行eDNA电泳条带分析。FCM方法：一抗：小鼠抗人survivin蛋白单克隆抗体；二抗：羊抗小鼠FITC—IgG抗体。单细胞悬液的制备，细胞DNA含量的染色，细胞的免疫荧光标记，上机检测。结果判定：凋亡峰：观察DNA直方图上是否出现凋亡峰凋亡率(％)：用下面的公式计算中文摘要凋亡率={器×100％Survivin基因蛋白表达的定量分析：按照Morkve等提出的荧光指数(用)表示survivin蛋白的相对含量。实验样品的平均荧光强度一对照样品的平均荧光强度FI=癌旁组织样品的平均荧光强度阳性结果

6、的判定：肿瘤细胞几值大于癌旁组织细胞的更。+2s为阳性，反之为阴性表达。统计方法：所有数据结果经Excel数据库整理，应用美国SAS公司的统计软件SAS6．12forwindows，进行成组t、t’检验，单因素方差分析，Z2检验，Fisher精确检验，直线回归与相关分析。以P≤0．05为差异在统计学上有显著性意义，P≤0．01为差异在统计学上有非常显著性意义。结果：1SurvivinmRNA的表达42例喉癌组织中有36例(85．71％)表达阳性，40例癌旁组织中有3例(7．50％)表达阳性。癌组织的阳性表达率明

7、显高于癌旁组织，两者之间在统计学上有非常显著的差异(仁0．001)。SurvivinmRNA的表达与年龄、淋巴结转移、吸烟史、饮酒史、病理分级无关。肿瘤体积<3cm和，>3cm病例喉癌组织中survivinmRNA阳性表达率分别为70．59％和96．oo％，统计学上两者之间有显著性差异(Fisher精确检验P=0．032，左侧)；声门上型、声门型、声门下型喉癌组织survivinmRNA阳中文摘要性表达率分别为100．00％、75．00％和60．00％，统计学上两者之间有显著性差异(Fisher精确检验P=O．

8、0029，双侧)，经两两比较得到声门上型与声门型之间有显著性差异(Fisher精确检验P--0．007，双侧)；声门上型与声门下型之间也有显著性差异(Fisher精确检验P=O．023，双侧)：而声门型与声门下型之问无显著性差异(Fisher精确检验P=I．000，双侧)。I、II期喉癌组织survivinmRNA阳性表达率68．75％低于III、Ⅳ期的96．15％，统计学上显著性差异